真核生物基因组总DNA的提取与鉴定教程.pptVIP

TE * * 基因组DNA 的分子量很大，在电场中泳动很慢，如果 发生降解，电泳图呈拖尾状。 0.5~1.4琼脂糖凝胶 * 基因组DNA的分离与纯化 一、酚抽提法的原理 以含EDTA、SDS的裂解液裂解细胞，经蛋白酶K消化后，用PH8.0的Tris 饱和酚抽提蛋白质，离心后取上层水相，无水乙醇沉淀DNA。 二、技术路线 破 膜 提 纯 沉淀、洗涤 细胞膜碎片，细胞器，脂、蛋白质，DNA，RNA 去除脂、 蛋白质 浓缩DNA、 去盐杂质 真核生物基因组 DNA 的提取（一） 1.低渗去除红细胞 2.裂解白细胞 真核生物基因组 DNA 的提取（二） 3.酚抽提 4.无水乙醇沉淀 500μl 真核生物基因组 DNA 的提取（三） 5.DNA沉淀的洗涤与干燥 6.DNA溶解与电泳鉴定 三 结果 琼脂糖凝胶电泳鉴定 EB与DNA的结合 EB可嵌入到碱基平面，使核酸在 UV 激发下发出桔红色荧光。 三 结果 琼脂糖凝胶电泳鉴定 The End 裂解液的作用 裂 解 液 EDTA SDS 乙二胺四乙酸(络合物) 二价金属螯合剂，抑制DNA酶 十二烷基磺酸钠（去污剂） 使细胞膜破裂；将核酸释放出来； 使蛋白质变性 Tris -HCl 缓冲夜，维持稳定的pH值（8.0） DNA酚抽提法示意图 酚的作用 酚可以使蛋白质变性沉淀、抑制DNA酶活性。 PH8.0的Tris溶液可以使抽提出的DNA进入水相 。 DNA酚抽提法示意图 蛋白酶K的作用 水解组蛋白，促进DNA与组蛋白的分开。 DNA的沉淀 无水乙醇沉淀 沉淀前往往加入NaAc等盐离子，作用是中和核酸分子表面的负电荷，有助于分子之间的聚集。 无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，无水乙醇使用前冰冻，可以减少DNA沉淀析出过程释放热量对DNA的损伤。 TE 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA 上样缓冲溶液（6 × 或10×） 溴酚蓝（电泳指示剂，约相当于300bpDNA） 二甲苯氰（电泳指示剂，约相当于4000bpDNA） 甘油/蔗糖（增加DNA溶液的密度） 0.5~1.4%琼脂糖凝胶 水相的吸取 SDS（去垢剂） * 血液的化学成分非常复杂，在正常生理情况下，其各种化学成分的含量相当恒定，仅在有限的范围内波动。但在病理情况时，尤其在肝、肾、心、胰等器官病变时，可引起血液一些化学成分的含量变动超过正常范围，所以分析血液的化学成分可以了解物质代谢的状况，并协作诊断疾病与估计预后。 DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。 * * 血液的化学成分非常复杂，在正常生理情况下，其各种化学成分的含量相当恒定，仅在有限的范围内波动。但在病理情况时，尤其在肝、肾、心、胰等器官病变时，可引起血液一些化学成分的含量变动超过正常范围，所以分析血液的化学成分可以了解物质代谢的状况，并协作诊断疾病与估计预后。 DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。 * TE * * 基因组DNA 的分子量很大，在电场中泳动很慢，如果 发生降解，电泳图呈拖尾状。 0.5~1.4琼脂糖凝胶 *