第10章__分子杂交技术hu学案.ppt

7.4.2 非放射性探针的双重原位杂交方法 双重荧光探针原位杂交方法 （1）直接法 不同颜色的荧光素标记两种探针，直接与靶核酸在标本原位杂交，杂交信号能在荧光显微镜，流式细胞仪和激光共聚焦显微镜下进行检测。 优点：简便。缺点：敏感性低。 荧光双或多重杂交法多用于染色体，培养细胞和冰冻切片。常规石蜡切片的自发荧光强，一般不适于直接荧光原位杂交。 （2）间接法 用地高辛和生物素分别标记的不同探针、杂交后，用不同荧光素标记的地高辛抗体和抗生物素抗体或卵白素检测杂交体。 已有FITC(绿色)TRITC(红色)和AMCA(aminomethylcoumarin acetic acid)兰色荧光标记的抗体商品供应。 7.5 原位杂交的PCR增敏法 Bagasra及其同事在1990-1993年成功的报告了原位杂交和聚合酶链反应结合法，简称为原位杂交PCR(PCR in situ hibridisation, PCRISH)。 利用PCR技术将靶核酸片段扩增，然后做原位杂交，即用标记的核酸探针与扩增了的DNA进行杂交，显示和定位，其敏感性可达到显示单个拷贝基因信号的程度。 7.6 原位杂交的CSA增敏法 1989年，Bobrow等首次报道了催化信号放大法(catalyzed signal amplification, CSA)。 1992 年，Adams等将CSA法用于提高免疫组织化学的