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实验十一 DNA的定量测定-二苯胺法 一、原理 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成-羟基-a-酮基戊糖，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物，在一定波长范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，可用比色法测定。 二、实验仪器 试管 移液管 7220分光光度计 三、实验试剂 1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。 2、二苯胺试剂： A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。贮于棕色瓶中。 B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制 临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可 四、试验步骤 1.标准曲线的绘制 取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂： 2.样品测定 吸取DNA样液1ml，加入二苯胺溶液2.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。 五、结果计算 按下式计算样品中DNA百分含量： DNA%=样液中测的DNA量/样液中所含样品量*100% * * 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 二苯胺试剂 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 DNA标准液 5 4 3 2 1 0 加毕，混匀，