2015Day2基因重组与基因组提取资料解读.pptVIP

Day2基因重组与基因组提取 基因工程中，我们通过载体携带基因进入宿主细胞进行扩增和表达。 载体必须具备的条件： 1.复制起点 2.利于检测的遗传表型(抗生素筛选等) 3.限制性酶切位点 4.适当的拷贝数 载体种类：质粒、噬菌体、病毒等。 质粒发现于细菌、放线菌和真菌细胞中 染色体外的稳定遗传因子 多数为双链、闭环的DNA分子 超螺旋状态存在于宿主细胞中 它具有自主复制和转录能力 质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质 质粒的存在使宿主具有一些额外的特性，如对抗生素的抗性等。 质粒(Plasmid) 蓝 / 白斑筛选通过使用弱组成型大肠杆菌启动子 ( tet ) 驱动 lacZ a - 肽表达而实现，而目标基因表达由相反方向的 T7 启动子驱动。 质粒pETblue-2（3.6kb）图谱 DNA 重 组－酶切和连接 限制性内切酶产生的末端 粘性末端——识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后，产生的末端为匹 配粘端 GAATTC CTTAAG 平末端——在回文对称轴上同时切割 DNA 的两条链，则产生平末端