疫苗生产的细胞培养试题.ppt

疫苗的添加剂 国际上趋势：疫苗中尽可能不用明胶 冻干疫苗中冻干保护剂使用明胶： – 动物源性明胶 – 猪源性明胶 – 牛源性明胶 ◇ 牛皮源性明胶 ◇ 牛骨源性明胶 ◇ 绝不能使用头骨和脊髓骨 indicate otherwise. For example, susceptible lambs fed with milk from scrapie-infected sheep have been shown to acquire PrPd in their ileum and rectal mucosa Konold, T ;(2008) Pruritus is a common feature in sheep infected with the BSE agent. BMC Vet Res 4, 16. 产生抗明胶IgE抗体，出现较重且多的过敏反应 疫苗生产的细胞培养和残留物 病毒毒种 ? 细胞培养体系 ? 添加剂及残留物控制 Requirements of an Effective Vaccine 安全： 疫苗必须保证不引发疾病和死亡 价廉： 价格低廉，WHO概算不 超过$1/剂 有效： 疫苗能诱导天然、体液和细胞免 疫反应，并且至少应保持几年 方便： 疫苗稳定、方便储运、方便给药，利益大于风险 病毒性灭活疫苗 关键点1 (病毒种子) Latent/occult viruses of safety concernin vaccine cell substrates 逆转录病毒： 逆转录病毒(内源或外源引入) α逆转录病毒属(禽白血病病毒, ALV) β逆转录病毒属(猴逆转录病毒,MPMV/SRV) γ逆转录病毒属(小鼠白血病病毒, MLV) RNA 病毒： 沙粒病毒 脉络丛脑膜炎(LCMV) DNA病毒： 腺病毒－相关病毒 Hepadenaviruses（肝DNA病毒属，包括鸭肝炎病毒） 疱疹病毒 乳头瘤病毒属 多瘤病毒属 轮状疫苗的猪圆环病毒污染 GSK 的轮状疫苗污染PCV1，其IPV的毒种污 染PCV1的DNA，3.8×103－1.9×107 /ml MERCK D的轮状病毒疫苗存在PCV2 均为Vero细胞生产的疫苗 PCV1不引起猪或人类疾病 PCV2与猪断奶后多脏器衰歇综合征有关 来自疫苗的PCV1的222（A-G）和706（T-G） 导致172位的aa由（异亮氨酸－苏氨酸） 推测该污染PCV1可能已适应Vero细胞 baboon endogenous and Flockhouse virus （狒狒内源性病毒和昆虫病毒的污染） β 逆 转 录 病 毒· 昆 虫 病 毒 的 污 然 宿主细胞残余DNA 生长因子 Growth-promoting proteins 生长因子可被生产生物制品用的细胞基质分泌； 但目前认为风险较小 生长促进作用短暂和可逆 本身不能自我复制 许多生长因子在体内较快失活 在特殊环境下，生长因子可促使细胞的肿瘤化，但细胞的肿瘤化依赖 生长因子的持续分泌和存在，至今尚未发现已用于生物制品生产的细 胞培养基质具有这种能力 干细胞 可分泌高水平的生长因子 高活性和高促生长能力 在使用干细胞制备生物制品的研究中须高度重视生长因子的风险 细胞基质—— 原代细胞 优点： 1、可以使用较简单的培养基和牛血清制备获得， 2、对大多数病毒均敏感适应，可产生细胞病变容易观察。 缺点： 1、最大的缺点是污染外源性感染因子，如病毒； 2、从不同的动物所获得的培养物对扩增病毒的敏感性和质 量可能不同； 3、非人灵长类动物很难获得； 4、获得的动物脏器所制备的细胞往往是多种类细胞，不同 批次不能保证获得的细胞的一致性。 原代细胞制备用动物 SPF (specific-pathogen-free) “closed” “封闭群” animal husbandry without any introduction of new animals fromoutside the maintained group prevents introduction of geneticallytransmit