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- 2016-08-10 发布于广东
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reach法规第四卷译稿-21
B.19. 体外姊妹染色单体的交换测定
1.方法
1.1 引言
见一般引言B部分
1.2 定义
见一般引言B部分
1.3.参考文献
无
1.4.测定法原理
姐妹染色体交换(SCE)测定法是一种短时测定法。它用于测定在一对被复制的姐妹染色体中的倒易DNA。SCE代表在表观匀称地区DNA复制产品的互换。虽然对于分子主要成分一无所知,交换过程可能包含了DNA的裂解和重组。SCE测定需要示差标记姐妹染色体,这可通过两个细胞周期间将溴化脱氧尿苷(BrdU)并入染色体DNA而做到。
如果适当,有无哺乳动物外源代谢活化体系,母体外哺乳动物细胞都接触于测定化学试剂下。且在含BrdU介质中培养两圈复制品。在处理纺锤体抑制剂(如秋水仙素)使细胞在有丝分裂(c-中期)中期富集,细胞被收集且染色体准备工作完成。
1.5.质量标准
无
1.6.测定方法描述
1.6.1 准备
初级培养基(人类淋巴细胞)或已固定的细胞线(如中国大鼠卵巢细胞)可被用于测定。还应检验细胞线有无细菌淋巴污染。
应使用合适的培养基方式和培养条件(如温度、培养容器、CO2浓度和湿度)。
在优先处理细胞后,测定物质应在培养基中准备,或溶解或悬浮在合适的显色剂中。培养基体系中最后显色剂浓度不能受到显著影响,细胞活体或生长速率和SCE影响频率应通过溶剂控制来监测。
有无外源性哺乳动物新陈代谢活化体系,细胞应接触于测定剂中。选择性的,在细
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