三.HPLC方法的建立课件.ppt

第三讲.HPLC分析方法的建立 一. RPC分析方法建立 二. NPC分析方法建立 三. GPC分析方法 四. HPLC应用实例 五. HPLC的定量分析 一.反相HPLC（RPC） 分析方法的建立 样品的制备 溶剂萃取 固相萃取 膜分离，超滤， 超临界萃取等 图1非离子样品的反相分离过程示意图 黑点表示在极性流动相和非极性固定相间分配的样品分子 影响RPC的保留的因素： 1.流动相的影响： 水甲醇乙腈乙醇四氢呋喃丙醇二氯甲烷 A+B： 水+有机溶剂 最佳分离条件：1k 10 2.%B的选择： 3.流动相强度： 4.色谱柱和柱温的影响： 非极性、非离子化合物的RPC保留值规则： (弱）未键合硅胶≤氰基C1（TMS）C3C4苯基C8≈C18（强） 通常柱温增加1℃，K会减少1%-2% 反相色谱的选择性： 溶剂强度的选择性 溶剂类型的选择性 柱类型对选择性的影响 温度对选择性的影响 1.溶剂强度的选择性 2.溶剂类型的选择性 3.柱类型对选择性的影响 4.温度对选择 性的影响： 反相色谱中分析方法的建立： 反相方法建立的推荐步骤： 1.调整%B，使0.5k20，（1k10更好） 2.检查峰拖尾或塔板数低的现象 3.如果必要，调整选择性 a.微调%B b.改变有机溶剂