原核基因表达调控-1试题.ppt

基因转录开放，β-半乳糖苷酶在细胞内的含量可增加1000倍。 乳糖(别乳糖)作为诱导剂，与R结合起去阻遏作用(derepression)，诱导了利用乳糖的酶类基因转录开放。 调控蛋白的活性由信号变构控制。在诱导物的作用下，阻遏蛋白构象改变而失去与操纵基因（O1）的结合能力。 a.没有诱导物存在下，两个二聚体之间形成铰链，因此N端结构域能与操作子序列结合。 b.诱导物-Lac抑制子的二聚体。与诱导物的结合导致结构的改变，从而降低了抑制子对操作子的亲和性。 许多调控蛋白都是变构蛋白(allosteric protein)，通过与效应物结合改变构象而改变活性，起到调节基因转录表达的作用。 在研究工作中很少使用乳糖作为诱导剂，因为培养基中的乳糖会被诱导合成的β－半乳糖苷酶催化降解，其浓度不断发生变化。实验室常用两种乳糖类似物——异丙基巯基半乳糖苷（IPTG）和巯甲基半乳糖苷（TMG），在酶活性分析中常用发色底物O-硝基半乳糖苷（ONPG）。因为它们都不是半乳糖苷酶的底物，所以又称为安慰性诱导物（gratuitous inducer)。 由于阻遏蛋白偶尔会脱离操纵子基因，所以操纵子的转录并非完全关闭，仍会有本底水平的表达，细胞内会有几个分子的β－半乳糖苷酶和透性酶。 葡萄糖对lac操纵子表达的影响 葡萄糖是细菌优先利用的糖类。当葡萄糖和其他糖类（比如乳糖）同时存在时，细菌只利用葡萄糖而不代谢别的糖类，这种现象称为分解代谢物阻遏（catabolite repression）。因此，乳糖操纵子只有在乳糖存在，同时葡萄糖缺乏时才会高水平表达。原因是乳糖操纵子除了受阻遏蛋白的调节，还要受到分解代谢活化子蛋白（catabolic activator protein，CAP）的调节。 3.2.2 CAP的正性调控 大肠杆菌优先利用葡萄糖作为碳源，葡萄糖的存在可防止从培养基中吸收其它碳源。 当葡萄糖和乳糖同时存在于培养基中时，lac启动子表达受阻，没有β-半乳糖苷酶活性。 CAP(catabolite activator protein)—分解代谢基因激活蛋白 同二聚体 DNA结合区 cAMP(cyclic AMP)结合位点 CAP能够与cAMP结合后形成一个二聚体，所以CAP又称为cAMP受体蛋白（cAMP receptor protein，CRP）。cAMP-CRP二聚体能够结合到启动子的上游识别位点上，通过募集RNA聚合酶激活乳糖操纵子的转录。 激活蛋白通常结合在启动子的上游协助RNA聚合酶与启动子结合。与之相反，阻遏蛋白结合在启动子的下游，阻止RNA聚合酶与启动子结合，或者阻止RNA聚合酶向前移动转录基因。 cAMP可与细菌中的受体蛋白CAP （cAMP Receptor Protein，也称为CRP；）特异结合，使CRP构象改变而活化。 CRP单体包括一个DNA结合区和一个转录激活区。 CRP以二聚体形式与DNA结合而发挥作用。 被cAMP活化的CRP能与1ac操纵子的启动子上游CRP位点特异结合。有利于形成转录起始复合物，并增强了RNA聚合酶的活性。使lac operon得到表达。 CAP具有独立的激活域和DNA结合域 lac启动子被CAP激活 RNA聚合酶在CAP的协助下，结合到启动子上。CAP由α亚基的CTD( carboxyl-terminal domain)识别。当与CAP相互作用时，α亚基CTD也在CAP位点附近与DNA分子发生接触。 CRP上有重要的三个位点参与基因转录激活过程： 与RNA pol的?亚基的羧基端结合区域（aCTD）、与?亚基的氨基端结合区域（aNTD）以及与?亚基结合区域。 在不同的操纵子中，CRP的作用可能有三种不同的方式。 在Lac操纵子中，CRP结合在紧邻启动子上的RNA pol结合位点上游，与aCTD发生作用，同时与?和?亚基相互作用。 在gal操纵子中，CRP结合区域与RNA pol结合的区域有重叠，它与aCTD、aNTD以及?亚基都有相互作用。 CRP在一些操纵子中可能有2个或多个二聚体结合在DNA的不同位点，例如在ara操纵子中，结合在2个不同位点上的CRP发挥作用。 CAP的正性调节（Positive Control of CAP） PEP:单糖磷酸转移酶系统(phosphoenolpyruvate: glucose Phosphotransferase system，PTS)是一种细菌质膜内的蛋白复合物，它同时被磷酸化并将糖类转移到细胞内。 复合物中的ⅡAGlc蛋白（crr编码）由于葡萄糖转运而失去磷酸化，它可结合乳糖透过酶而阻止乳糖进入细胞。 ⅡAGlc蛋白的磷酸化形式可激活腺苷酸环化酶，当葡萄糖进入细胞时ⅡAGlc蛋白发生脱磷酸化，导致腺苷酸环化酶活性