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新生儿溶血病产前免疫抗体检测 手工操作流程 一、 原理 母婴血型不合引起的新生儿溶血病（HDN ABO及Rh血型系统，胎儿或新生儿红细胞被来自于母体的IgG抗体包被，使红细胞破坏，引起新生儿溶血病，轻则影响胎儿的脏器及智力发育，重则引起胎儿在子宫内死亡。只有通过产前血型血清学检查，才能预测新生儿溶血病的发生情况，以便有针对性的采取有效的预防措施来减轻对胎儿造成的伤害。 血样的准备 采集夫妇双方抗凝血标本 分离出女血浆 各配1%红细胞悬液，鉴定夫妇双方ABO Rh（D）IgM抗体灭活 取200μl女血浆与200μl 2-Me混合后于37℃水浴中孵育1小时。 夫妇交叉及不规则抗体筛选试验 取DianaCoombs卡第1孔加夫1%红细胞悬液50μl，第2～4孔分别加1% Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选红细胞50μl，然后分别加50μl女灭活血浆，置卡在37℃孵育器内15分钟。 将卡放到戴安娜专用离心机中1100转/分钟，离心9分钟看结果。 解释： 项目 反应结果 女灭活血浆+男细胞 + + - - 女灭活血浆+筛细胞 - + - + 解释 女血浆中存在与男细胞不合的ABO系统IgG抗体 女血浆中存在与男细胞不合的ABO系统IgG抗体，同时也可能存在ABO以外的IgG抗体 女血浆中不存在与男细胞不合的IgG抗体 女血浆中存在与男细胞相合的ABO以外的IgG抗体 是否检查效价 是，检查ABO系统IgG效价 是，最好送血站做特异性抗体鉴定 否 否 有意义 ≧64 ≧16 否 否 效价测定 ABO系统IgG抗体效价测定 1、※排6个小管 1、第一管、50μl中和血浆＋350μl生理盐水 2、第2-6管：分别加入200μl生理盐水 3、从第一管吸出200μl加入第二管，再从第二管吸出200μl加入第三管，依次倍比稀释。滴度：16、32、64、128、256、512DG Coombs卡一张，一般用4孔（用户可从32或64开始，酌情加减），每孔分别加入与夫 同型 1%的标准红细胞悬液50μl,然后依次加入倍比稀释好的血清（血浆）各25μl。 5、置Diana孵育器，37℃孵育15分钟。 6、置Diana离心机，离心1100转/9分钟。 7、胶卡报告结果：结果+向前第2管判读滴度。4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血 双群 备注： 1、父亲为A型测抗－AB型测抗－BAB型测抗－A－BO细胞筛查，如有凝集，说明是ABO系以外的抗体，需作抗体鉴定。 3、动态检查母体血清中的IgG有临床意义的血型抗体，能更直接、准确确认HDN。 （二）ABO系统以外IgG抗体效价测定 按ABO系统IgG抗体效价测定方法中的稀释方法，测定效价用O型有相应抗原的筛选红细胞进行检测。 *如有疑问敬请参阅操作手册或致电佰利亚集团800-810-2590