血液学一般检查汇编.ppt

（四）检验后血液标本的处理 检验后废弃的标本应由专人负责处理，用专用的容器或袋子包装，由专人送到指定的消毒地点集中，一般专门机构采用焚烧的方法处理。 三、血液标本的抗凝 抗凝：用物理或化学的方法，除去或抑制血液中某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。 抗凝剂：能阻止血液凝固的化学试剂 常用化学抗凝剂 1.枸橼酸钠（柠檬酸钠） 浓度：109mmol/L(32g/L) 抗凝原理：与血液中的钙离子形成 可溶性螯合物，阻止血液凝固 适用于：血栓与止血检验（1：9） 可稳定Ⅴ因子和Ⅷ因子； 血沉测定（1：4）； 因其毒性小，也用于配制血液保存液 2.乙二胺四乙酸盐（EDTA） EDTA有钠盐和钾盐，钠盐溶解度低于钾盐，一般用钾盐 浓度：1.4～1.6mg/mL血 抗凝原理：与血液中的钙离子形成可溶性螯合物， 阻止血液凝固 适用于：全血细胞分析（CBC），血小板计数 禁忌于：凝血因子与血小板功能检查 3.肝素 抗凝原理：抗凝机制复杂 （1）加强抗凝血酶Ⅲ作用，抑制凝血活酶的形成， （2）抑制血小板聚集与释放反应，从而阻止血液凝固 （3）灭活氨基酸蛋白酶，抑制凝血酶的形成 适用于：血细胞比容测定和临床生化多项检查 禁忌于：凝血功能检查； 白细胞计数和分类计数检查，因为它可使白细胞聚集并使血涂片染色后产生蓝色背景 4.草酸钠 与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀，阻止血液凝固 对凝血因子Ⅴ保护作用差，不适于凝血检查 5.双草酸盐抗凝剂 草酸钾使红细胞体积缩小，草酸铵是红细胞体积增大，两者以适当比例混合，恰好不影响红细胞体积和形态，可用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等项目检查。 四、血涂片的制备 一张良好的血涂片，其标准是厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、边缘整齐、两边留有空隙 1.载玻片的清洁 新购置的载玻片必须用浓度约1mol/L HCL浸泡24h后，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。 使用载玻片时，切勿用手触及表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油渍 2.血涂片的制备 影响因素 涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关 血滴大、角度大、速度快则血膜越厚，反之则血膜越薄 血膜分布不均：推片边缘不齐、用力不均和载玻片不清洁所致 血细胞比容高于正常时，血液粘度较高，保持小的角度可得到满意结果，反之，应保持大的角度 五、血细胞常用的染色方法 （一）瑞氏染色法 1.瑞氏染液的组成 酸性染料伊红（E-）+碱性染料亚甲蓝（M+） +甲醇 伊红为钠盐，染色部分为阴离子；亚甲蓝是氯盐，染色部分是阳离子。 甲醇的作用：（1）溶解伊红和亚甲蓝 （2）固定细胞形态 优点：固定和染色合并在一起，操作简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好 缺点：对细胞核的着色略差 2.细胞的着色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。 化学的亲和作用+物理的吸附作用 嗜酸性物质：细胞中的碱性物质，与酸性染料伊红结合染成 红色，如：血红蛋白和嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒 嗜碱性物质：细胞中的酸性物质，与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色，如淋巴细胞胞质和嗜碱性粒细胞胞质中的嗜碱性颗粒 中性物质：中性颗粒呈等电状态与伊红亚甲蓝均可结合，染 淡紫红色 细胞核蛋白染成紫红色 红细胞的染色 原始红细胞和早幼红细胞：胞质和核仁中含有较多的酸性物质，故染成浓厚的蓝色 中幼红细胞：既含有酸性物质，又含有碱性物质，故染成红蓝色或灰红色 成熟红细胞：只含有碱性物质，则被染成粉红色 3.PH对细胞染色的影响 使用PH6.4～6.8的磷酸盐缓冲液 如环境PHPI(PI为该蛋白质的等电点），则该蛋白质带正电荷，即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红 PHPI:在碱性环境中负电荷增多，易于亚甲蓝结合染色偏蓝 缓冲液偏酸（PH6.4):正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色 缓冲液偏碱（PH6.8)：所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗；嗜酸性粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。 4.瑞氏染液的质量评价 （1）血涂片实际染色评价 （2）吸光度比值（RA） 瑞氏染色的成熟指数以RA=1.3±0.1为宜 新配制的瑞氏染液往往偏碱，染色效果较差，须存放一定时间，待染液成熟，染液成熟的过程主要是亚甲蓝逐渐转变为天青B的过程。在密封条件下，贮存时间越久，转化的天青B越多，染色效果越好。 5.染色效果分析 （1）血膜外观呈淡紫红