第三章蛋白质研究技术分解.ppt

第三章 蛋白质研究技术 第一节 蛋白质的分离纯化 第二节 蛋白质的鉴定 第三节 蛋白质的检测 第四节 蛋白质的结构分析 第一节 蛋白质的分离与纯化 一、蛋白质分离纯化的基本原则 二、蛋白质分离纯化的方法 一、蛋白质分离纯化的基本原则 1、选择丰度高、便于提取的材料 （磷酸单脂酶,肝、胰、脾丰富，但选几乎不含磷酸二脂酶的前列腺） 2、了解目的蛋白质的稳定性 （肝素材料的冷冻和干燥） 3、探索有效的抽提和浓缩方法 (包括细胞破碎，抽提系统，浓缩：沉淀、吸附、超滤、透析、冻干等) 4、建立一套层析组合方法和检测方法 　　（如吸附、离子交换、亲和层析、凝胶过滤；纯化评价） 5、包装、贮存方法（生产日期、批次、含量或效价） 二、蛋白质分离纯化的方法 粗提： 1.盐析: 固体加入法： 饱和溶液加入法: 2.有机溶剂沉淀: 3.结晶（10-50mg/ml） 4.等电点沉淀 精提 ：1.离心（centrifugation） 　 2.电泳（electrophoresis） 　 3.层析（chromatography） 1.离心（centrifugation） 原理：悬液中的各种粒子（细胞，细胞器及大分子）有不同质量（mass）或密度（density），故在离