7第七章N-聚糖详解.ppt

第7章 N-聚糖 关锋 fengguan@jiangnan.edu.cn 本章着重描述脊椎动物体系中天冬酰胺N-连接寡糖（N-聚糖）的生物合成，其中包括对N-聚糖的生成、加工、蛋白折叠的控制以及结构多样性的机理。从生物学角度概述在脊椎动物整体中的遗传缺损所确定了的N-聚糖结构与功能的关系。 背景 N-聚糖的生物合成被阐明于20世纪60-70年代。当时使用的是无细胞体系和凝聚素抗性的细胞系。 发现： 1. N-聚糖的合成需要生成与脂相连的寡糖前体结构，该结构在内质网中被整个转移到新生蛋白上。N-聚糖与共有序列Asn-X-Ser/Thr中的Asn天冬酰胺相连。 2. 所有的真核细胞都产生N-聚糖，且均保留着合成这个多萜醇-寡糖前体的最初几个步骤以及在内质网中依次进行的加工反应。 3. N-聚糖结构多样性的程度，即在高尔基体中的高甘露糖型N-聚糖可转化成所有的、各种各样的杂合型和复合型N-聚糖的亚型。这是由于存在大量的由脊椎动物基因组编码的酶，包括存在于内质网和高尔基体的糖基转移酶和糖苷酶。 与N-聚糖合成相关的糖基转移酶和糖苷酶基因的分子克隆始于20世纪80年代，至今仍在进行。这些编码的酶表现出显著的底物专一性和各自独特的表达模式，因而在特定的细胞类型中，N-聚糖的结构有所变化。 多萜醇寡糖前体的合成 已有许多综述描述了N-聚糖的生物合成途径。第一件事是组装一个与Dol-P脂连接的寡糖前体。 多萜醇寡糖前体向新生蛋白质的转移 位于真核生物内质网膜内的一个由多亚基组成的蛋白复合物，能将脂连接的寡糖前体转移到新翻译生成的蛋白质的天冬酰胺残基上，这个复合物叫寡糖基转移酶（OST）。所有OST都有1-8个跨膜结构域的跨膜蛋白，OST复合物结合脂连接的寡糖，再通过切断GlcNAc-P的高能键，将GlcNAc转移到新生翻译的蛋白质上，在此过程中，释放Dol-P-P。 早期对N-糖基化修饰肽链的研究揭示，接纳体天冬酰胺周围所需的最小序列是Asn-X-Thr/Ser，这里X是除了脯氨酸之外的任何氨基酸。 最近对狂犬病毒糖蛋白模型的研究提出：在Ser/Thr残基后面氨基酸的一致性能影响糖基化的效率。 对模型糖蛋白的研究表明，多萜醇寡糖前体的转移发生在来自活性核糖体的大约30个氨基酸的位置，这与微粒体组分的蛋白酶处理的结果相一致，也符合在内质网腔区室内转移的空间要求。 N-聚糖加工的初始步骤和蛋白质折叠控制 当多萜醇寡糖前体中的寡糖以共价键连接到天冬酰胺残基之后，一系列加工反应就发生了。最初的几步反应似乎在所有真核生物细胞中都是保守的，而且已知，在调节脊椎动物糖蛋白的折叠和溶酶体的穿行中，这几步反应起关键作用。 葡萄糖苷酶Ⅰ和Ⅱ首先作用于与蛋白质连接的寡糖前体，依次去掉全部3个葡萄糖，这些葡萄糖残基的移去与蛋白质折叠机理有关，这个过程决定了某一特定的糖蛋白在内质网内的保留时间。 发生不恰当折叠的蛋白质要通过一种位于内质网腔内的α-葡萄糖转移酶重新进行葡萄糖基化。对发生不正确折叠蛋白质来说，葡萄糖基转移酶可能起到一个传感器作用，但是传感器的本质目前还不清楚。重新葡萄糖基化的N-聚糖被保留在内质网中，或者重新折叠成正确的构象，或者被去葡萄糖基化和被降解。 钙连蛋白是分子伴侣之一，它首先被确认与信号序列受体（SSRα）相关，也与新翻译生成的Ⅰ类主要组织相容性复合物的重连相关。进一步研究指出，钙连蛋白选择性地结合新合成的完全折叠的蛋白质。此外，钙连蛋白已被确定是一种凝聚素，它特异性地结合分泌途径中带有N-聚糖的糖蛋白，而不结合非糖基化的分泌蛋白质。 与末端甘露糖连接相关的N-聚糖的加工和穿行 当完成葡萄糖修剪和从内质网释放之后，N-聚糖就可被用于内质网和高尔基体内的糖苷酶反应。这些N-聚糖被称为高-甘露糖亚型，说明它们的末端是未取代的甘露糖残基。这种N-聚糖首先在内质网中生成Man8GlcNAc2-Asn结构，然后出现在前高尔基体中。在前高尔基体中存在两个加工途径。 N-聚糖的多样性变化 在过去的20年间，通过认识和了解N-聚糖生物合成中的糖基转移酶和糖苷酶的底物特异性，知道了被加工的高甘露糖型Man5GlcNAc2-Asn N聚糖就作为高尔基体内的N-聚糖进一步产生多样性变化的起始物。在脊椎动物中，细胞外N-聚糖以高甘露糖亚型、杂合亚型和复合亚型的形式存在。 杂合型和复合型的N-聚糖可以带两个或多个含GlcNAc的分支结构，这种分支结构被比作天线。在形成多天线的N-聚糖结构时，GlcNAc残基可以通过6种不同的GlcNAc转移酶（Ⅰ-Ⅵ）连接到三甘露糖基。 杂合型：是指那些同时具有取代的甘露糖残基（与GlcNAc相连）和未取代的甘露糖残基的N-聚糖。 复合型：是指那些α3-和α6-连接的甘露