第二章 分光光度技术 分光光度技术 分光光度技术(分光光度法)主要是指利用物质特有的光谱来鉴定物质性质及含量的技术,其理论依据是Lambert和Beer定律。 分光光度法是比色法的发展: 比色法只限于在可见光区,分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。比色法用的单色光是来自滤光片,谱带宽度从40-120nm,精度不高,分光光度法则要求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过3-5nm,在紫外区可到1nm以下,来自棱镜或光栅,具有较高的精度。 分光光度技术 基本原理 分光光度计 基本结构简介 分光光度技术的基本应用 分光光度法的误差 分光光度技术基本原理 一、光的基本知识 光是由光量子组成的,具有二重性,即不连续的微粒性和连续的波动性。波长和频率是光的波动性的特征,可用下式表示: C λ=─── V 式中λ为波长,具有相同的振动相位的相邻两点间的距离叫波长。V为频率,即每秒钟振动次数。C为光速等于299770千米/秒。 光属于电磁波。 自然界中存在各种不同波长的电磁波,分光光度法所使用的光谱范围在200nm-10μ(1μ= 1, 000nm )之间。其中200nm-400nm为紫外光区,400nm-760nm为可见光区,760nm-10,000nm为红外光区。 自然界的电磁波谱 自然界的电磁波谱 ①γ射线(γ-r
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