分子生物学--分子克隆技术课件.pptVIP

基因操作技术及其应用 参考书目资料 《分子克隆实验指南》（第三版）：美J.萨姆布鲁克等著, 黄培堂等译，科学出版社，2008. 《Gene IX》：Benjamin Lewin编著. 《基因工程原理》：吴乃虎，科学出版社，1998. 《分子生物学实验指导》：郜金荣，叶林柏，武汉大学出版社，2007. 《基因工程》：张惠展，华东理工大学出版社，2005. 分子克隆 基因工程的核心技术是DNA重组技术 分子克隆技术 又称为重组DNA技术，是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序。 供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。 (“交通工具车子”)——载体 有了切割与缝合（ligase）基因DNA的工具，还得有一个“车子”将重组DNA送到宿主细胞中去。 逆转录酶 使真核基因的制备成为可能。 （1）真核基因组庞大而复杂，不易制得基因图谱。 （2）即使有了基因图谱，因为真核基因有内含子，不能在原核表达系统剪接出mRNA，没有成熟的mRNA就不能得到相应得产物。 （3）经过逆转录mRNA→cDNA (complementory DNA)得到的cDNA文库要比基因组文库小得多，所以筛选阳性克隆就方便得多。 四、分子克隆的技术