非预染蛋白分子量标准-大学本科毕业.docxVIP

摘 要蛋白质分子量标准，即蛋白分子量Marker，是由一种或几种分子量大小已知且高度纯化的蛋白质混合而成，是广泛应用于电泳和免疫印记分析中的试验试剂。蛋白质分子量标准的主要功能是确定未知蛋白质的分子量大小，指示电泳效果及转膜的成败。相应的有三种类型的蛋白质分子量标准：非预染蛋白质分子量标准、预染蛋白质分子量标准和Western 专用的预染蛋白质分子量标准。建立高效的、可靠的蛋白质分子量标准生产体系对蛋白质分子量标准的生产和商业化有重要价值。本课题对非预染蛋白分子量标准的制作流程及方法进行探索，以求获得满足蛋白质组学研究所需的蛋白质分子量标准，并能够熟练掌握蛋白分子量Marker的制作流程。本实验预混几种已纯化好的且分子量已知的蛋白质，采用SDS电泳的方法制作比较清晰的蛋白Marker条带。在实验中，我们主要对现有几种蛋白质进行筛选，以确定符合要求的蛋白质；探讨了点样量和点样体积对电泳条带清晰度的影响，并确定最终可用于制作Marker的蛋白质，及其合适的点样量和点样体积。结论：在实验室现有的几种蛋白质中，我们最终选用了牛血清白蛋白（BSA）和溶菌酶，蛋白分子量分别为66KD和14KD。预混后，在上样量为8μL，即实际蛋白含量在6.4μg时，凝胶电泳可呈现两条较为清晰的条带，其范围为14~66KD，适用于低分子量蛋白的检测，有一定的参考价值。关键词：非预染蛋白分子量标准；制备；质