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* * * * * * * * * * * * * * 微生物 实验三 主要内容 ☆ 操作：肥达试验 ☆ 示教：肠道杆菌、霍乱弧菌 生化反应 ☆ 录像：肠道杆菌 细菌感染的防治原则 ※ 肥达试验 Widal Reaction 用已知的伤寒沙门菌O抗原和H抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管凝集实验 目的： 测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验 原理 器材： 试管6支/人，试管架1个/2人 吸管1支/人，标签1张/人，乳胶头1个/人 4人/组 伤寒杆菌H抗原菌液 伤寒杆菌O抗原菌液 甲型副伤寒杆菌H抗原菌液 乙型副伤寒杆菌H抗原菌液 待检： 病人血清（1:10稀释） 1. 每管加入0.5ml生理盐水 2. 倍比稀释血清: 在第一管中加0.5ml待检血清 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml弃去 操作步骤： 3. 每管加入0.5ml菌液 4. 震荡混匀后，置43℃，2hr后观察结果 2. 倍比稀释血清: 在第一管中加0.5ml待检血清 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml弃去 抗体稀释度： 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 阴性对照 抗体稀释度： 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 阴性对照 3. 每管加入0.5ml菌液 以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 ※ 结果判断 第6管 均匀混浊，无凝集块 ＋ 少量凝集，上清液较混浊 ＋＋ 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集呈颗粒状 ＋＋＋ 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 ＋＋＋＋ 全部凝集，液体澄清，大片凝集块 效价判定：以出现 ++ 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体的效价 血清稀释度 效价 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 1：160 1：320 1：80 — ++++ +++ ++ + - - ++++ +++ ++ ++ - - ++++ +++ + + - - + - - - - - 操作：肥达反应 诊断意义： 正常值：由于隐性感染或预防接种，血清中通常含有一定水平的抗体，一般以O ≥ 1：80、 H≥1：160 、 H甲或H乙≥ 1：80才有诊断意义 O抗体与H抗体的性质： O抗体 — IgM，出现早，维持时间较短（数月） H抗体 — IgG， 出现晚，维持时间较长（数年） O、H 高 O、H 低 O 高 H 不高 感染早期或交叉反应 O 不高 H 高 感染晚期、预防接种或非特异性回忆反应 类别 凝集效价 诊断意义 O抗体与H抗体的诊断意义： 感染可能性大 感染可能性小 记录结果 菌液 血清稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 效价 伤寒H 伤寒O 甲副H 乙副H 注意事项： 1、请同学们小心拔下橡胶乳头 2、最后观察完结果，请同学们把标签撕掉再归还试管 3、H、O、副甲、副乙菌液里面的滴管不能混淆乱放 4、所有的玻璃物品使用时请轻拿轻放，切勿打坏 常用酸碱指示剂： 名称 酸色 中性色 碱色 中性红 红 红 黄 酚红 黄 红 红 酸