三章串讲2探索.ppt

如何形成转录复合物并进行转录？ 利用足迹法（footprint）和DNA测序确定启动子的序列 利用突变法确定原核生物启动子序列保守性 ?因子功能：ATP依赖性的RNA-DNA解旋酶 水解三元复合物 以六聚体蛋白形式完成酶学功能 不依赖于ρ因子的终止（强终止子） 转录后加工 帽子结构 mRNA加尾 内含子的剪切 mRNA的共同特点： The chemistry of group II intron splicing and RNA intermediates produced are the same as that of the nuclear pre-mRNA. 核 酶（ribozyme） 核酶是指一类具有催化功能的RNA分子，通过催化靶位点RNA链中磷酸二酯键的断裂，特异性地剪切底物RNA分子，从而阻断基因的表达。 本章涉及的概念 转录 翻译 编码链------模板链 启动子： 转录复合物（开放、封闭、三元、二元复合物） 下降突变------上升突变 核心（启动）元件-----上游启动子元件 ?因子-----内终止子 核糖体结合位点----SD序列 聚腺苷酸化作用断裂特异因子（CPSF） 内含子-----外显子 RNA的剪接------内含子的变位剪接 Chambon法则 snRNP复合物 核酶 * 第三讲 生物信息的传递 （上）从DNA到RNA 转录过程 1.转录基本过程： 模板识别： 二元复合物 DNA、RNA poli. 转录的起始：三元复合物 DNA、RNA poli.和RNA 转录延长： 5’? 3’方向延长RNA链 终止： 强终止子、弱终止子(ρ因子） 2.转录后加工: 帽子结构 mRNA加尾 内含子的剪切 RNA聚合酶的功能 调控元件 原核生物(E. coli)的RNA聚合酶 参与转录延伸 只与转录的 起始有关 变性DNA，在启动子处解旋成单链； 阅读启动子，确定转录方向和模板链。 真核细胞中三类RNA聚合酶特性比较 酶 RNA Poli.I RNA Poli.II RNA Poli.III 细胞内定位 核仁 核质 核质 转录产物 rRNA (28S,18S, 5.8S) hnRNA*, snRNA, mRNA tRNA, 5SRNA, snRNA *hnRNA: heterogeneous nuclear RNA,核内不均一RNA, RNA的前体 真核生物 RNA Poli. II 转录因子： TBP TAFs TFIIA TFIIB TFIIF TFIIE 前启复合物 gene TTGACA AACTGT TATAATPu ATATTAPy transcribed initiation site -50 -40 -30 -20 -10 1 10 5’ -35 Recognition site -10 Binding site Pribnow box 1 2 3 原核生物启动子 真核生物RNA Poli. II所识别的启动子区 Enhancer 测定原核生物启动子序列的方法 –35区 –10区 ……T85T83G81A61C69A52……T89A89T50A65A100…… 真核生物核心启动元件的确定 1. 核心元件(TATA box): –25～–30 bp区 2. 上游启动子元件 CAAT box ，GC box，Enhancer SV40基因启动子对基因转录活性的影响 不依赖于ρ因子的终止（强终止子）or 内在终止子（intrinsic terminator） 依赖于ρ因子的终止（弱终止子 ） 转录的终止 依赖于ρ因子的终止 ρ因子参与的RNA合成终止模式“穷追”（hot pursuit）模型 结构特征 转录生成的RNA形成发夹结构 发夹结构末端紧跟着6个连续的U串 功能：核酶 发夹式结构和寡聚U的共同作用使RNA从三元复合物中解离出来。 原核生物真核生物mRNA的比较 真核生物 原核生物 半衰期 长 短 顺反子 单顺反子 多顺反子