第04章复制.ppt

聚合反应的特点 DNA 新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行 。 一、DNA复制的酶学 （一）解螺旋酶（helicase） 可以将DNA双链解开成为单链。大肠杆菌中发现的解螺旋酶为DnaB。 蛋白质（基因） 通用名 功能 DnaA 辨认起始点 DnaB 解螺旋酶 解开DNA双链 DnaC 协同和运送DnaB 一、DNA复制的酶学 （一）解螺旋酶（helicase） 可以将DNA双链解开成为单链。大肠杆菌中发现的解螺旋酶为DnaB。 蛋白质（基因） 通用名 功能 DnaA 辨认起始点 DnaB 解螺旋酶 解开DNA双链 DnaC 协同和运送DnaB （二）DNA单链结合蛋白 （single chain binding protein-SSB） 可以维持模板的单链状态并保护模板不 受核酸酶的降解。随着DNA双链的不断解开， SSB能不断的与之结合、解离。 拓扑异构酶作用 通过切断并连接DNA双链中的一股或双股，改变DNA分子拓扑构象，避免DNA分子打结、缠绕、连环，在复制的全程中都起作用。 （四）引物酶（primase） 是一种RNA聚合酶，在复制的起始点处以DNA为模板，催化合成一小段互补的RNA。引物酶能直接在单链DNA模板上催化游离的NTP合成一小段RNA，并由这一小段RNA引物提供3’-OH， 经DNA聚合酶催化链的延伸。 （五）DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 原核生物的DNA聚合酶 链的延伸 前导（领头）链和冈崎片的形成 顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。 另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为岡崎片段(okazaki fragment)。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 链的终止 引物的切除和缺口的填补 随从（滞后）链DNA片段的连接 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 真核生物 DNA的复制只发生在S期。 S期是细胞周期的关键时刻，DNA经过复制而含量增加一倍，使体细胞成为4倍体。 ? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 复制的方式 ——半保留复制(semi-conservative replication) 复制的高保真性(high fidelity) 双向复制(bidirectional replication) 半不连续复制(semi-discontinuous replication) 一、半保留复制的实验依据和意义 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 二、双向复