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实验二多克隆抗体的制备
实验二 多克隆抗体的制备 目的：掌握溶血素的制备和溶血素单位滴定的原理和方法。 原理：绵羊红细胞（SRBC）免疫家兔后可以产生抗SRBC的抗体，该抗体能与SRBC结合，在补体参与下，能使SRBC溶解，此抗体也称溶血素，常用于补体结合及补体活性测定等实验。 实验器材： 1.器具： 冰箱、水浴箱、显微镜、平皿、小试管、滴管、注射器。 2.材料：家兔、全羊血、20%羊红细胞悬液。 实验方法 1.溶血素的制备 2.溶血素单位滴定法 取不同稀释浓度的溶血素按表中所示混合，37 ℃，30min观察结果,凡是最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为1个单位。 表 溶血素的滴定（ml） 注意事项： 1.抗原注射的方式和量要准确。 2.补体和绵羊红细胞要新鲜。 作业：计算本组的溶血素单位。 * LOGO LOGO 20%羊红细胞1.0ml 静脉 15 20%羊红细胞1.0ml 静脉 12 全羊血2.5ml 皮内 9 全羊血2.0ml 皮内 7 全羊血1.5ml 皮内 5 全羊血1.0ml 皮内 3 全羊血0.5ml 皮内 1 注射剂量 注射途径 注射日期 最后一次注射后，间歇3d，自耳静脉采血，滴定溶血素单位。如果达到1：5000以上时，可由心脏或颈动脉放血，分离血清，加甘油4℃保存 全不溶 0.5 1.70 0.30 0.5（1:12800） 7 大半溶 0.5 1.70 0.30 0.5（1:6400） 6 全溶 0.5 1.70 0.30 0.5（1:3200） 5 全溶 0.5 1.70 0.30 0.5（1:1600） 4 全溶 0.5 1.70 0.30 0.5（1:800） 3 全溶 0.5 1.70 0.30 0.5（1:400） 2 全溶 摇匀置37℃水浴箱内15~30min 0.5 1.70 0.30 0.5（1:200） 1 假定结果 2%SRBC 生理盐水 补体（1:30） 溶血素ml 管号 * LOGO
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