丹酚酸A对心肌细胞离子通道以及收缩力调控作用.pdfVIP

中文摘要 丹参酸A对心肌细胞离子通道以及收缩力的调控作用 摘 要 L．型钙离子通道(L．type calcium channels，LTCCs)介导并调控Can+ 进入细胞，对心肌细胞的正常生理功能有重要的意义。LTCCs主要分布 于肌纤维膜上，能够被去极化电压所激活，同时内流的Ca2+则能引起通道 失活关闭。L．型钙离子电流(L．type calcium current，ICa-L)不仅在心肌的 兴奋一收缩耦联中起着极为重要的作用，同时参与心肌动作电位的形成和 维持并与心律失常的发生有关。钙通道阻滞剂能够抑制心肌细胞Ca2+内 流，降低细胞内钙，减弱心肌收缩力，降低心肌氧耗量，在临床上可用于 高血压，冠心病，急性左心衰等病症。 慢激活延迟整流钾电流(the slowly activating delayed rectifier potassium current，IKs)和快激活延迟整流钾电流(the rapidly activating delayed rectifier potassium current，IK，)在心肌动作电位的复极化过程中发 挥重要作用。当电学重构或基因突变导致IK。和I融通道功能异常时，将引 起K+外流减少，使心肌复极减慢，动作电位延长，产生Q．T间期延长综 合征(Long QT syndrome，LQTS)，表现为心电图Q．T间期延长并发生恶 性心律失常性晕厥及猝死。IK。和I心抑制剂则可能导致Q—T间期延长而引 发心律失常。 丹参(Salvia miltiorrhiza)在中国有几千年的临床应用历史，它被广 泛用于治疗高血压，冠心病，心肌梗塞，血液循环疾病和其他的心血管疾 病。越来越多的研究表明，丹参主要的水溶性成分为丹参酸A(Salvianic acidA，SAA)，具有多种药理学活性，如抗炎和抗肿瘤，神经和心肌保护 作用，提高免疫力等。在前期的工作中，我们发现丹参注射液可以阻断 LTCCs，SAA作为丹参注射液主要的成分之一，可能是丹参注射液阻断 LTCCs发挥心肌保护作用的物质基础。 目的：本研究主要探讨了SAA心脏保护作用的机制。通过电生理膜 片钳技术观察S从对大鼠心室肌细胞LTCCs以及HEK293细胞上表达的 KCNQl／KCNEl、hERG通道电流的调控作用，通过IonOptix测量系统观 察SAA对大鼠心室肌细胞收缩力的影响。 万方数据 中文摘要 方法： (1)成年大鼠心室肌细胞分离成年雄性Sprague．Dawley大鼠麻醉 后开胸取出心脏进行急性分离，心脏在Langendorff装置上用含0．02％胶 原酶II的无钙台氏液在37 oC下进行酶解消化。酶消化完毕后自左心室分 段剪取心室肌组织放入盛有Kreb’S(I④液)的试管中轻轻吹打使之分散 成单个细胞。单个心肌细胞通过200目尼龙网过滤收集，收集的心室肌细 胞在室温下静置于KB液中1小时后逐渐增加KB液中Ca2+浓度直到1．8 mlVl。而大鼠缺血性心室肌细胞则通过对大鼠尾静脉注射垂体后叶素诱导 心肌缺血10分钟后参照正常大鼠心肌细胞分离方法准备。所分离的心室 肌细胞需在分离后6小时内进行实验。全细胞膜片钳技术记录SAA对Ic孙L 及其动力学过程的影响。 (2)细胞培养HEK293细胞系在37 oC，5％C02和95％空气条件下 常规培养，并每隔1-2天进行细胞传代。HEK293细胞需要经过脂质体转 染才能表达人心脏KCNQ 1／KCNE 1(IK。)钾离子通道。表达hERG通道(IK，) 的HEK293为稳定转染细胞株培养后可直接用于膜片钳实验。穿孔膜片钳 技术记录SAA对IK。和I心及其动力学过程的影响。 (3)细胞收缩测定成年雄性Sprague．Dawley大鼠心脏进行急性分 离，用经典酶解法分离得到单个心室肌细胞。所分离的心室肌细胞需在分 离后6小时内进行实验。细胞收缩与离子浓度同步测量系统则用于检测分 离的成年大鼠心肌收缩力。 结果： 1 心室肌细胞Ica．L的鉴定 将细胞膜钳制于一80 mV，采用不同程度的去极化(．60．+60 mV，A10 mY)激活Ica．L。结果显示Ic。。L能够被特异性钙通道阻断剂维拉帕米几乎 完全阻断(PO．05)。 2 S从对心室肌细胞Ic孙L的抑制作用 3x10。4 M SAA可显著抑N4,室肌细胞Ic孙L，抑制率为35．5 4-O．9％。 细胞外液冲洗后Ic孙L可部分恢复到用药前水平(19．8-4-2．7％)(n=5)。 3 S从对心室肌细胞Ic孙L作用的量效关系 结果显示，SAA可浓度依赖性抑制Ic。-Lo 3×10一、10～、3x10～、104 和3×104 M S从对Ica．L的抑制率分别为9．5-t-O．9％、21．0 4-2．1％、29．6 4- 万方数据 中文摘要