实验三_单向琼脂扩散实验技巧.pptVIP

【实验目的与要求】 掌握单向琼脂扩散试验的原理、操作方法、 结果分析及临床应用 * * 临床免疫学实验指导 检验医学院 免疫学教研室 吴荣泉 实验二、 单向琼脂扩散试验 【实验原理】 将适量的抗体加入琼脂内制成免疫琼脂板，打孔，在孔中 加入待测抗原，抗原可向四周呈辐射状扩散，当抗原，抗体在比例适宜时形成白色沉淀环. 沉淀环直径与抗原含量成正比。 用标准抗血清和已知浓度的抗原（或国际参考品）制成标准 曲线。通过测定样品沉淀环直径大小，可从标准曲线中读出抗原的含量。 本试验主要用于检测标本中各种Ig、补体的含量等，具有高灵敏性，高特异性特点。 【试剂与器材】 1. 羊抗人IgG血清（兔抗人血清，购买） 2. 标准参考血清(标准IgG质控物，购买) 3. 待检人血清（IgG—抗原） 4. pH7.4 0.01M PBS缓冲液（或NS） 5. 琼脂粉（制备1%免疫盐水琼脂液） 6. 载玻片、打孔器、 37℃恒温箱、湿盒、 可调微量加样器等 用于制作 标准曲线 【操作注意事项】 1. 制备抗体琼脂板 琼脂温度必须严格控制，温度 太低琼脂会凝固，太高则会影响抗体的活性 2. 加样孔内的琼脂应挑干净，切不可损坏孔的边 缘，确保每孔的液面基本一致 3. 加样精确，不能逸出孔外，否则结果