中药血清药理学研究方法探讨与思考黄峰(精选).docVIP

中药血清药理学研究方法探讨及思考 黄峰 中药学 2110948107 摘 要 中药及其复方药理学研究逐渐采用了血清药理学的方法，这成为一种新思路越来越被重视。本文就血清药理学的方法学探讨、问题等情况进行了综述，并在此基础上提出新的方法学思考及对其在中药和复方药理研究当中的应用前景做了展望。 关键词 血清药理学；方法学；探讨；评价 中药血清药理学是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液，分离血清，用含有药物成分的血清进行体外实验的一种实验技术。于上个世纪80年代提出，由于其比较真实地反映中药的药效及其作用环境，并有助于中药复方化学成分研究及中药药动学研究的深入，目前越来越受到人们的重视。血清药理学用于中药研究的整个思路方法过程，包括动物模型的选择、动物给药方案确定、确定采血时间、含药血清的预处理和保存等。学习血清药理学的研究方法，是运用其进行中药研究的基础，也有利于做进一步深入的学习探讨血清药理学，使其思路更加完善丰满，方法更加规范化。 1 中药血清药理学研究方法探讨 血清药理学方法的规范化研究关键是中药血清制备方案的规范化研究，包括供体(实验动物)的选择、给药方案(给药剂量、次数、天数)、含药血清采集时间，含药血清的预处理和保存。 动物模型制备 实验动物选择 常用实验动物为小鼠、大鼠[1]，也可用兔、豚鼠[2]等,一般家兔和大鼠应为首选。不同种属的动物，血清成分不同，人与动物血清更存在差异。陆慧晶[3]认为，选择动物时应尽量选与人类生物特性近似的物种，制备血清的动物应与获取离体器官、组织细胞的动物相一致，从而缩小或避免动物血清之间以及动物血清和人类血清之问在理化、生物等特性上的差异，提高实验结果的可靠性。 1.1.2 离体组织(细胞)选择 体外培养细胞的供体动物与含药血清的供体动物应同种属。因为实验是要在体外尽可能准确的再现在体实验时药物与机体相互作用的整个过程，所以应尽可能减少因动物种属差异而造成的免疫反应。因此，在体外培养实验中宜采用同种单一血清，既为细胞提供营养，又为药物载体，还避免了多种血清的干扰[4]。 1.2 动物给药方案 1.2.1 给药前禁食 饮食可能影响中药复方体内动力学和临床疗效。如食物对口服小柴胡汤者体内甘草甜素、甘草次酸和黄芩素等的吸收影响明显。因此应根据中药复方的功效特点、实验要求，决定给药前禁食与否，并拟订给药后采血时间。目前，给药前实验动物多禁食6—12h，不禁水[5]。 1.2.2 给药途径 一般在制备含药血清时，供体动物的给药途径应该与临床给药途径一致，以避免由于给药途径的不同带来结果的差异. 目前中药复方多用口服(灌胃)给药来制备含药血清，但其他给药途径亦可使药物进入血清。同时，由于中药新剂型不断产生，在实验中也可根据实际情况，尝试使用注射、粘膜、呼吸道等给药途径制备含药血清。 1.2.3 给药剂量 血清药理学很重要的一个问题是给药剂量的确定，合适的给药剂量，对保证实验的成功很重要。给药剂量除了要跟临床用量尽可能相一致之外，还要考虑因含药血清加入反应体系后，浓度被稀释，使反应体系的浓度达不到在体条件下的药物浓度等问题，所以目前尚无统一的标准，主要还是要通过预实验来确定给药剂量。关于给药剂量的研究目前有一下方面： 王力倩等[6]在研究苦参、仙鹤草的抗癌作用时发现，以参考公式(给药剂量=临床常用量×动物等效面积系数×培养基内血清稀释度)计算给药剂量，得到的含药血清对肿瘤细胞体外生长有抑制作用，而比此给药量少I倍含药的血清则无明显作用。 李仪奎等[7]提出两种方法：一是增大给药剂量，即给药剂量=在体实验的给药剂量×反应体系中被稀释倍数(同上述王力倩所提参考公式)。然而，其不足之处是给药剂量与血药浓度并不是呈等比增加，况且受到灌胃药物浓度和体积的限制。二是按新药药理研究的技术要求设计剂量给药，将含药血清制成冷冻干燥粉，以冻干粉形式加人反应体系使其达到所需浓度。其优点是：根据需要提高体外反应体系中的含药浓度或形成等容，有利于血清的储藏保存。 王宁生等[8]认为，给药剂量以整体模型动物的有效剂量8一l8倍为宜。 1.2.4 给药次数与时间间隔 关于给药次数与时间间隔的想法主要是根据药代动力学理论，以固定给药时间间隔，相同剂量多次重复给药后血药浓度达到稳态，并将在稳态下不同采血时间取得的含药血清进行实验，均表现较高而且相似的药理作用强度。而药代动力学理论用的最多的是半衰期理论，即理想给药时间应按药物半衰期间隔给药，连续5～7个半衰期使血药浓度处于稳态。但是中药及其复方成分十分复杂，半衰期难以测定。目前常用的方法有：1次给药或间隔2～4小时给药，或1天1～3次，连续3～l0天。单次给药较多次给药药理活性明显低，或单次给药制备的含药血清产生作用的给药剂量极大(临床等效剂量5倍以上)。如