LineGene 9600 Series 使用说明使用说明.pptxVIP

LineGene 9600 Series 使用说明 在开始/程序菜单中单击“LineGene9600”，也可以双击或右键桌面上LineGene9600快捷键启动软件。 打开仪器后底板的电源开关，按下仪器前面上的Run Switch，是仪器处于运行状态 以绝对定量为例，选择文件菜单下的新建或者单击图中的绝对定量或单击工具栏新建实验下的绝对定量。 注：相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数；相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。 绝对定量的主界面：通过点击左侧设置下的检测项目、样本信息、反应板、程序设置进行设定四个选项（左侧红框）对样品进行设定。 点击检测项目，即左侧红色框显示。为了方便寻找文件，一定要填写实验名；用户名、备注可以不填写。一般情况下，一个实验只有一个检测项目和一个检验项，其他情况另作说明。本实验中，只是点击绿色框右下三角选择实验所用的染料。染料包括FAM,SYBR,HEX,TET,VIC,JOE，以FAM为例。 检测项目的设置 样本信息设置 在做荧光定量PCR，使用的样品一般为多个，故点击批量添加，弹出如右图。在开始样本ID处填上样本名字；样本数量出填上反应体系的个数，即有多少个反应管。 例如在样本ID处填1，样本数量填10则显示如图；若在样本ID处填2，样本数量填10则显示样本ID为02-11的样本；若在样本ID处填a，样本数量填10则显示样本ID为a01-a10的样本 单击样本信息，如右图 反应板设置 单击选择反应孔位（如图红色框区域），除了选择反应板孔位，还可以右键单击反应板孔位进行复制、粘贴等。也可以选中一个孔位，然后按住鼠标左键拖动进行多项选择；也可以选中一个孔位，按住Ctrl件再单击其他孔位进行多孔选择。以选中十个孔位为例，如下图： 单击反应板 反应板设置 根据标准样品中溶解样品的浓度，设置浓度单位和浓度，如箭头所指。浓度单位的选择，根据标准样品中的浓度，选择合适的浓度单位，浓度单位包括copies/ml、IU/ml、pg/ml、fg/ml、pM、fM。浓度：选择相应的放置标准样品的反应孔填写相应的浓度，1.00e+00表示为表示1*10的零次方。（检查一下可否写0*e+00）。 注意：确保PCR反应管位置与设置反应板的布局一致 如果反应样品中有标准样品，则选中放置标准样品的反应空，然后单击红色框右侧的三角，选择下拉菜单中的S（下拉菜单包含U：未知样品；S：标准样品；N：阴性对照；P：阳性对照），所得结果如下图。 反应板设置 单击程序设置，显示如下图 程序设置 程序设置 点击运行，点击红色框中的开始运行，设置反应体积和热盖温度。反应开始运行。 注意： LineGene9600系列荧光定量PCR检测系统采用200μL离心管放置反应体系（反应体系最佳体积为10μL-50μL）。 加入反应体系后要用离心机进行离心操作，确保反应体系处于离心管底部，且内部不含气泡。 如果所使用离心管数量小于设置反应板孔数量，安插离心管时，尽量均匀地安插在反应板孔中央。 运行 结果分析 扩增曲线 点击分析下的扩增曲线，显示如图，默认全选所有的反应板孔，也可以选择单个孔查看单个孔的扩增曲线。扩增曲线横坐标为扩增反应的循环数，纵坐标为该循环数下的荧光强度。 结果分析 标准曲线 点击分析下的标准曲线，显示如图。横坐标为样品浓度，纵坐标为Ct值，图中直线为通过标准样品的扩增而得到的标准曲线。点击待测样品的反应板孔即可在标准曲线上显示出其对应横坐标的浓度。或者是在后面得到标准曲线后，将待测样品的Ct值带入，即可得到该待测样品的浓度。 结果分析 熔解曲线 熔解曲线(Dissociation curve)：随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。温度升高的过程中DNA双螺旋逐渐打开，嵌入到该部分的燃料又恢复到游离状态，导致荧光信号减弱，当DNA双螺旋解旋到1/2时，DNA解旋速率达到了最快，荧光强度降低速率也达到最快。所以当以荧光强度变化导数作为纵坐标时，温度达到一定值时，曲线会显示出一个特征峰，该峰对应的温度即为Tm 点击分析下的熔解曲线，为了方便观察，我们一般看导数曲线。点击红框部分。 点击分析设置如下图 可以对Ct、标准曲线和溶解曲线进行设置，然后点击保存分析。同样点击标准曲线和熔解曲线进行相应的设置。 查看结果 报告模板设计 点击菜单栏中报告，弹出下拉菜单，点击报告模板设计，对报告进行设置；单击报告，选择默认报告打印设置，对其进行设置，然后打印即可 导出到数据库 可将实验导出为excel等格式文件