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紫外可见分光光度计操作步骤打开电源开关，在仪器完成初始化后按选择键进入光度测量界面（开机，进入光度测量主界面）设定工作波长，（按GOTOλ）可进入波长设定界面，上下键调节所需波长。自动校零，在光度测量界面下按ZERO键对当前波长下的参比液进行调零0.000Abs、100%T开始测量，将待测试样放入光路按测试进行测量，数据直接以表格形式显示并存储。测量完毕整理仪器。基本概念光的波粒子二象性：光是一种电磁波，具有波动性和微粒性。光的最小单位是光子，光子具有一定的能量（E）它与光波频率（V）或波长（λ）的关系式为E=h.v=h.c/λE=能量（eV）h=普朗克常数6.626*10^-34 V=频率Hzλ=波长 c=光速光子的能量与频率和波长相对应，波长越长能量越小，波长越短能量越大原理：利用物质对200~760nm波长范围内光的选择吸收而进行物质含量的分析方法。吸光度：溶液对各种单色光的吸收程度方法特点、适用对象及分析的理论依据方法特点：灵敏度高，适用于微量组分测定；准确度高，相对误差2%~5%满足微量分析的要求；操作简单，分析速度快；应用广泛，价格低廉，发展前景广阔。适用对象：可应用于定性和定量分析。由于许多物质在可见光区无特征吸收，而在近紫外有特征吸收，能提供一些有机化合物的官能团信息，所以紫外吸收光谱对推断有机化合物的结构起了很重要的作用。紫外可见分光光度法除了定量测定外还可以作定性鉴别，纯度检查，而可见分光光度法主要在微量成分的分析方面应用广泛。分析的理论依据：定性分析理论依据:不同物质它的结构不同，或者说分子能级的能量或能量间隔不同，因此不同物质将选择性地吸收不同能量的外来辐射。定量分析的理论依据：朗伯比尔定律是吸光光度法的定量依据，即当一束平行单色光垂直入射通过均匀，透明的吸光物质的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层的厚度的乘积成正比，这个关系成为朗伯比尔定律。紫外分光光度计基本组成部件主要组成部件：光源——单色器——吸收池——检测系统——信号显示系统光源：能够发射所需的足够辐射强度和稳定性的连续光谱（可见分光光度计常用钨丝灯和卤钨灯作光源，紫外分光光度计常用氢灯和氘灯作光源）单色器：将光源发出的连续光谱分解为按一定顺序排列的单色光装置。单色器包括色散元件（棱镜和光栅）狭缝及透光系统等几部分组成。吸收池：用于盛放被测溶液，让单色光从中穿过，且决定透光液层厚度的无色透明器皿。一般有石英和玻璃两种，石英吸收池适用于可见光区和紫外光区，玻璃只能用于可见光区。检测系统：检测器的作用是将透过吸收池的光转变成光电流。目前用得较多的检测器是光电管和光电倍增管。信号显示器：放大信号并以适当方式记录下来。大多数型号的分光光度计装配有微处理机一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。注意事项及维护注意事项：每次测量结束或溶液更换后，必需对比色皿及时清洁，否则会导致误差。 防止光电管疲劳，不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断。维护：a分光光度计的检验：1：波长校正：通常利用干涉波光片，镨钕或氧化滤光片来校正波长。2：吸光度校正：3比色皿校正：编号，标出光路方向，蒸馏水测定吸光度，相同即可配对使用。 b保养1仪器工作台要稳固，室温15~28，相对湿度45~65，无腐蚀气体，室内光线不宜过强。2提前预热3保持仪器清洁干燥4预热时硬打开比色槽5一段时间后或搬动后应进行波长精密度检查。工作曲线法物质对光的选择性吸收基本原理：物质对光的吸收是物质和光能相互作用的一种形式。由于光的波粒二象性只有当进射光的能量同吸光物质的基态和激发态能量差相等时才会被吸收，而物质的基态和激发态是由物质的原子结成和原子间相互作用决定的，不同的物质的能态不同，对光的选择性吸收也就不一样。所以物质对光具有选择吸收性。标准曲线法在朗伯比尔定律的浓度范围内，配制一系列不同浓度的标准溶液，显色后，在相同条件下分别测定各溶液的吸光度值，以标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，理论上得到一条过原点的直线绘制曲线注意问题1不得少于5个浓度点，其中两点必须接近该分析方法的上限和下限的浓度点。2校准曲线应作空白校正后进行回归，截距一般控制在+-0.0053测定样品浓度时，其浓度应在校准曲线的浓度范围内，不可以将曲线外延分析测试条件的选择显色反应及显色条件的选择A显色反应：将试样中被测组分转变为有色化合物的化学反应是显色反应，选取要求：1选择性好，在一定条件下显色剂仅与待测组分发生显色反应，干扰物质少。2灵敏度高。3显色剂的有色化合物稳定，不容易受空气或溶液其他组分影响。4显色剂与生成的有色化合物之间的颜色要有大的差别。5显色反应易于控制。水中硝酸根离子的测定原理：利用硝酸根离子在220nm波长的吸收来测定硝酸盐氮。如果水样中溶解的有机物在220nm和275