碱性磷酸酶(AKP)课件.pptxVIP

碱性磷酸酶（ALP） 功能 结构 催化机理 金属离子的作用 功能：将底物分子(核酸、蛋白质、生物碱)上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。 一般用于催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。 碱性磷酸酶（ALP） 同工酶 来自肝脏：ALP1、ALP2、ALP6 来自骨细胞：ALP3 来自胎盘及癌细胞：ALP4 来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞：ALP5 二聚体蛋白 中央：10层β-折叠；两侧：15个 不等的α-螺旋； 顶部：单一的α-螺旋、三层β-折叠。 每个亚基含499个AA，均具有一个活性中心 酶中心有一个空腔口袋，用于与磷酸酯结合。 结 构 Zn1 His-331、His-412的咪唑氮 Asp-327的羧基的两个氧 H2O 磷酸酯的氧原子 配位环境 Zn2 Asp-369、Asp-51的羧基的其中一个氧 His-370的咪唑氮 H2O 磷酸酯的氧原子 Mg Asp-51的另一个氧 Thr-155、Glu-322羧基上的一个氧原子 三个水分子 催化机理 底物磷酸酯嵌入酶的结合部位，磷酸酯的两个氧原子分别与Zn1和Zn2配位，形成两个Zn原子之间的磷酸盐桥 其它的磷酸的氧原子则与Arg-166的胍基形成氢键 与Mg配位的OH-，使Ser去质子化，则Ser的氧原子有更强的亲核性 去质子化的Ser进攻磷原子，从而导致Ser-残基的磷酸化，并形成共价Ser-磷酸盐中间体(仍然与Zn配位) 中间体的磷原子断裂P-OR键 磷酸酯被绑定到Ser-102中的活性位点 Mg配位的水分子现在作为一个质子酸，将一个质子给Ser-102，则P-Ser键断裂 Zn1原子配位的氢氧根离子进攻磷酸基，形成P-OH键，最终形成无机磷酸盐与底物的非共价结合形式。 H2O取代无机磷酸，完成催化反应 ①锌离子在碱性磷酸酶中有广义Lewis酸的作用，极化底物，使之成为一个良好的亲电试剂。 金属离子的作用 ②酶与底物以金属离子Zn为桥接点，金属将底物磷酸引导到正确的位置（Ser-活性部位），使酶促反应顺利进行。 金属离子的作用 ③金属Zn1中和离去基团的负电荷，是RO―能够顺利离去。 金属离子的作用 ④Mg定位了水分子，催化Ser-102的质子化和去质子化的反应。 金属离子的作用 ①锌离子在碱性磷酸酶中有广义Lewis酸的作用，极化底物，使之成为一个良好的亲电试剂。 ②酶与底物以金属离子Zn为桥接点，金属将底物磷酸引导到正确的位置（Ser-活性部位），使酶促反应顺利进行。 ③金属Zn1中和离去基团的负电荷，是RO-能够顺利离去。 ④Mg定位了水分子，催化Ser-102的质子化和去质子化的反应。 金属离子的作用 ①可直接参与磷代谢，在钙、磷的消化、吸收、分泌及骨化过程中发挥了重要作用 ②在基因工程中主要是应用该酶处理经限制性内切酶切割后的载体DNA，去除载体DNA两末端的5′-磷酸残基，以防止载体DNA自我环化，从而提高其重组效率 。 AP的生理及研究作用 谢 谢