第七章微生物的遗传和育种B.ppt

（四）原生质体融合 原生质体融合是通过人工方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体发生融合，并产生重组子的过程。 应用原生质体融合技术后，细胞间基因重组的频率大大提高了，在某些例子中，原生质体的重组频率已大于10-1 。 第五节 菌种的衰退、复壮和保藏 一、菌种的衰退与复壮 （一）衰退的防止 1、衰退（degeneration） ：由于自发突变的结果，而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 2.常见的衰退现象 菌落和细胞形态的改变 生长速度缓慢，产孢子越来越少 抵抗力、抗不良环境能力减弱 代谢产物生产能力下降 致病菌对宿主侵染力下降 3、防止菌种衰退的方法 ① 控制传代次数 ② 选择合适的培养条件； ③ 采用不宜衰退的细胞进行传代 ④ 采用有效的菌种保藏方法。 （二）菌种的复壮（rejuvenation） 使衰退的菌种恢复原来优良性状。 狭义的复壮从衰退的群体中找出未衰退的个体， 广义的复壮：利用自发突变（正变）不断地从生产中选育优良菌种 菌种的复壮措施： ①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 ②通过寄主体内生长进行复壮； ③淘汰已衰退的个体 二、菌种保藏 1. 目的：① 存活，不丢失，不污染 ② 防止优良性状丧失 ③ 随时为生产、科研提供优良菌种 二、菌种保藏： 2. 原理： （1）首先选用优良的纯种，最好是休眠体，（如分生孢子、芽胞等）， （2）其次创造长期降低微生物代谢强度，难以发生突变的环境条件（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）。 3.菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上（内） 移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 方法 ①低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 ，3-6月。②石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。1-2年。 （3）干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间1-10年。 ④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。5-15年 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196℃）。适用于各种微生物的较理想的保藏方法。 15年以上。 国内外菌种保藏机构 中国微生物菌种保藏委员会 CCCCM 美国的典型菌种保藏中心 ATCC 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 国内菌种保藏机构 中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM）。1979年7月成立。委员会下设六个菌种管理中心： 普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）：中科院微生物所，北京AS，真菌和细菌；中科院武汉病毒研究所，武汉AS-IV，病毒。 农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）中国农业科学院土壤肥料研究所，北京（ISF）。 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），轻工业部食品发酵工业科学研究所，不久（IFFI）。 4. 医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）中国医学科学院皮肤病研究所，南京（ID）真菌；卫生部药品生物制品检定所，北京（NICPBP），细菌；中国医学科学院病毒研究所，北京 IV） ，病毒。 抗菌素菌种保藏管理中心（CACC）：中国医学科学院抗菌素研究所，北京（IA）；四川抗菌素工业研究所，成都（SIA），新抗生素菌种；华北制药厂抗菌素研究所，石家庄（IANP），生产用抗菌素菌种。 兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）农业部兽医药品监察所，北京（CIVBP）。 （二）转导（Transduction） 借助缺陷噬菌体为媒介，把供体细胞中DNA片段携带到受体细胞中，从而使后者获得前者部分遗传性状的现象，称转导。 获得新遗传性状的受体细胞称为转导子（transductant）。 转导过程不需要细胞接触，而是以噬菌体为载体 什么是缺陷噬菌体？ 转导主要分为： 完全普遍性转导 普遍性转导 流产普遍性转导 低频局限性转导 局限性转导 高频局限性转导 （1 ?? 普遍性转导（Generalized transduction） 定义：由于完全缺陷型噬菌体携带了供体菌染色体片段，当它去感染受体菌时，使后者获得这部分遗传性状的现象称为普遍性转导 完全普遍转导证明实验 供体菌→野生型（鼠伤寒沙门氏菌 ） 受体菌→ 各种营养缺陷型 完全缺陷型噬菌体----P22，感染复数 1 特点：供体的任何基因都有可能进入受体细胞 A