第五章微生物的遗传变异和育种.ppt

定向培育一般是指用某一特定环境长期处理某一微生物培养物(群体)，同时不断对它们进行移种传代，以达到积累和选择合适的自发突变体的一种育种方法。 由于自发突变的频率较低，变异程度较轻微，所以培育新种的过程一般十分缓慢。 2 、定向培育优良菌种 (二) 诱变育种 诱变育种就是利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，促进其突变频率大幅度提高 诱变育种除提高产量外，还可改进产品质量、扩大品种和简化工艺等目的。 三、诱变方法与机理 1、物理诱变： 紫外线： 紫外线照射应放在暗室内进行，为了避免光复活作用，应在红光下操作。采用15～20瓦、波长为253．7nm左右的紫外线灯紫外线灯照射时间每次约10～20s，重复2～3次，或一次照射20~40s。 X射线 放射性同位素 2、化学诱变： 诱变剂： 亚硝酸、硫酸二乙酯、亚硝基胍等 注意事项： 选择适宜的诱变剂及剂量，适当的温度和PH，终止反应 诱变育种的基本环节 筛选过程以分初筛与复筛两阶段进行为好。 前者以量(选留菌株的数量)为主，后者以质(测定数据的精确度)为主。 诱变育种工作中的几个原则 选择简便有效的诱变剂 挑选优良的出发菌株 选用最适剂量 利用复合处理的协同效应 第四节 基因重组 重组是分子水平上的一个概念，可以理解成是遗传物质分子水平上的杂交。 凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经过遗传分子的重新组合后，形成新遗传型个体的方式，称为基因重组。 (一)接合 通过供体菌和受体菌完整细胞间的直接接触而传递大段DNA的过程，称为接合。 一、原核微生物的基因重组 接合：是细菌通过菌毛相互连接沟通，将遗传物质（主要是质粒DNA）从供体菌转移给受体菌。 受体菌直接吸收了来自供体菌的DNA片段，通过交换，把它组合到自己的基因组中，从而获得了供体菌的部分遗传性状的现象，称转化。 (二)转化 CaCl2法转化大肠杆菌的原理 DNA重组分子在体外构建完成后，必须导入特定的受体细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。 质粒DNA转化大肠杆菌 转化率的影响因素 超螺旋结构的载体质粒往往具有较高的转化率。 受体细胞应与所转化的载体DNA性质相匹配. 如pBR322转化大肠杆菌JM83株，其转化率不高于103/mg DNA，但若转化ED8767株，则可获得106/mg DNA的转化率。 感受态细胞的制备对转化率影响最大。对于Ca2+诱导的完整细胞转化而言，菌龄、CaCl2处理时间、感受态细胞的保存期以及热脉冲时间均是很重要的因素，其中感受态细胞通常在12-24小时内转化率最高. (三) 转导 通过缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞的DNA片段携带到受体细胞中，从而使后者获得了前者部分遗传性状的现象，称为转导。 根据转导基因片段的范围，可将转导分为两类：普遍性转导（转导的DNA可以是供菌染色体上的任何部分）、局限性转导（转导的DNA只限供菌染色体上的特定基因）。 普遍性转导( generalized transduction) (四)原生质体融合 通过人为方法，使遗传性状不同的两细胞的原生质体发生融合，并产生重组子的过程，称为原生质体融合或细胞融合。 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂交DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。 第五节 基因工程 基因工程的应用 在生产多肽类药物、疫苗中的应用 改造传统工业发酵菌种 动、植物特性的基因工程改良 基因工程在环境保护中的应用 目的基因（即外源基因或供体基因）的取得 载体系统的选择， 目的基因与载体重组体的构建， 重组载体导入受体细胞， 工程菌或工程细胞株的表达、检测以及实验室和一系列生产性试验等。 基本操作包括： 营养缺陷型的筛选 营养缺陷型(auxotroph)是指通过诱变而产生的，在一些营养物质(如氨基酸、维生素和碱基等)的合成能力上出现缺陷，因此必须在基本培养基(minimal medium)中加入相应的有机营养成分才能正常生长的变异菌株。 分组讨论题目 实验室为了开发一种降解含油废水的微生物菌剂，需要建立一个具有此功能微生物菌种库，请同学们利用所学，开动脑筋设计实验方案！ 问题 营养缺陷型菌株在基因工程中的应用？ 冷血双胞胎实验 * 第五章 微生物的遗传与变异 目的：对微生物遗传变异规律的深入研究，不仅促进了现代生物学的发展，而且还为微