线栓法大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)制备方法.pdf.doc

线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备 前 言 相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文 献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作 的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样 的感觉）。为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO 模型的战友的摸索过程，提高模型制作 的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型 有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。 第一部分 线栓模型制备理论及经验 ⒈ 插线法局灶性脑缺血模型简介 八十年代 Koizumi 和 Longa 创用了不开颅的大鼠 MCA 可逆性脑梗塞模型，此后，应用插 线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐 渐取代开颅法而成为最流行的方法。该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭 动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。从 ECA 插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到 大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模 型。此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。 1994 年 Huang 等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。1997 年 Hara 等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。此后不断有学者借助于显微技术 和多功能生理监测手段建立小鼠局部线栓脑缺血模型[57,58]。国内蒋晓帆等[59]，王芙蓉等[60] 也对该方法进行了研究。 线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元 对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具 有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。控制好易变因素，可避 免实验结果的不稳定性。但线栓造模也并非完美无缺，存在着下列不足：①线栓造模过程是 非直视下的手术，血流是否完全阻断不能即刻得知。②动物品系、体重、批次会影响结果。 动物饲养条件好的单位所繁育的动物，可以使影响程度降低。③操作者的科研训练影响结果。 严格的训练和足够例数的实践可以复制出稳定的结果。④血管破裂出血。操作不小心极易刺 破血管或拔线栓时引起出血。轻柔、精细的操作可以减少血管破裂的发生。   2 大鼠颈部及颅内动脉解剖及常用插线位置  3 大鼠大脑中动脉阻断实验的总结和心得（来自 zhuqing0506 战友） 本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO 模型），这方面的资料我查了 一些，这个实验我也作了一段时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在 15min 左右 完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。虽然前面有很多前辈发 了很多 MCAO 的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以前的贴 子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。虽然做实验总 会有郁闷的时候，不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。衷心祝福大家 能把实验做的成功、完美！！！！ 实验前准备 麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温） 保温：60W 白炙灯高度为 37cm 直接照射能使肛温保持在 37℃ 栓线的制备： 1.取熔点为 56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。直径为 o．24mm、长 5cm 的鱼线 一端 5mm 长的一段，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固 地粘附在鱼线一端的表面，其直径为 0.26mm。就这样，普通的鱼线即可变成规相一致头端 光滑圆钝的栓线。  2.在鱼线 18mm 的位置用涂改液标记一个白色点。 TTC 的配制：用 0.2mol/L 磷酸缓冲液（PBS）配成 2%TTC 溶液（pH7.5）,避光保存。 体重与栓线直径： 线栓直径 0.24mm 采用的 SD 大鼠，体重 250-300g。 实验方法： 动物用 10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳 突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）， 在 CCA 远心端和近心端及 ECA 处挂线备用。用微动脉夹暂时夹闭 ICA，然后近心端结扎 CCA、 ECA。然后在距 CCA 分叉部 4mm 处剪一小口，将拴线插入到 ICA，这时用绕在 CCA 远心端 的细线轻轻系牢拴线。（不可过紧，否则近线困