第2章分子克隆工具酶.pptVIP

* * * * * * 二、大肠杆菌DNA聚合酶I大片段(Klenow fragment) （1）Klenow酶的基本性质： 大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理,获得N端三分之二的大肽段,即Klenow酶。 Klenow酶仍拥有5’→3’的DNA聚合酶活性和3’→5’的核酸外切酶活性，但失去了5’→ 3’核酸外切酶活性。 （2）Klenow酶的基本用途（可被T4 DNA聚合酶代替）： 补平由核酸内切酶产生的3′粘性凹陷末端 抹平DNA的3′粘性凸出末端 DNA片段的同位素末端标记 cDNA第二链的合成 双脱氧末端终止法测定DNA序列 三、T4 DNA聚合酶(T4 phage DNA polymerase) （1）T4 DNA酶的基本特性： 有3’→5’的核酸外切酶活性和5’→3的DNA聚合酶活性。 在无dNTP时，可以从任何3’-OH端外切 －在只有一种dNTP时，外切至互补核苷酸。　 －在四种dNTPs均存在时，聚合活性占主导地位。 （2）基本用途 * 西南大学生物技术专业 基因工程 * 四、T7噬菌体DNA聚合酶(T7 phage DNA polymerase) 持续合成能力最强 有3’→5’ 外切酶活性是Klenow酶的1000。 可代替T7噬菌体DNA聚合酶的用途。 五、耐热性的DNA聚合酶（第八章详讲） 来自噬高温细菌，如Taq、Pfu等。 高温下具有5’→3’