荧光，吉姆萨染色.pptVIP

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2016-08-20 发布于重庆
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荧光，吉姆萨染色.ppt

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荧光，吉姆萨染色

凋亡细胞的荧光标记形态观察目的：观察细胞核形态，判别凋亡细胞。原理：DNA荧光染料Hoechst33258能透过完好细胞膜进入核内，凋亡细胞染色质致密，常呈月牙形斑块或碎裂，并可见凋亡小体。非凋亡细胞核染色较均匀，荧光较淡，死亡细胞不染色。用品：培养肺癌细胞(95D) 荧光染料Hoechst33258 PBS (无Ca++ 、 Mg++)，PH 7.2 4%福尔马林、PBS配荧光显微镜步骤 1.单层培养细胞，用PBS洗2次； 2. 4%福尔马林固定10分钟后；用PBS洗1次 3.以5~10ug/mI Hoechst33258染色5~10分钟水冲洗 4.荧光显微镜观察。结果凋亡细胞核呈强亮的兰色荧光及明显核形态，正常细胞仅呈弱荧光，死细胞不被Hoechst332 染色。正常细胞凋亡细胞细胞胞核Hoechst33258荧光染色克隆形成率计数 Giemas染色法适用细胞染色和染色体染色用品：原液的配置: Giemsa 0.25g 甘油 2 5ml 甲醇 25ml 缓冲液的配置:Ⅰ 1/15mol KH2PO4 Ⅱ 1/15mol Na2HPO4 　　　　　　 Ⅰ:Ⅱ=4:6 pH=6.9 染色液配置:1份原液+9份缓冲液步骤： 1.单层培养细胞，PBS洗二次； 2.甲醇固定 10分钟; 3. 用滴管将配好的染色液布满整孔; 4.染10分钟，用自来水冲去染液； 5.显微镜计数，统计克隆形成率。 * *