蛋白质的一级结构及分析.ppt

蛋白质的一级结构及其分析 Peptides and Proteins 氨基酸的多聚物，分子量大小差异极大，可以是2或3个到成千上万个氨基酸残基连接而成。 两个氨基酸残基之间通过共价的酰胺键（肽键）连接形成一个二肽；三个氨基酸残基连接成三肽；…；有限数量的数十个氨基酸残基连接成寡肽；多个氨基酸残基则连接成多肽；蛋白质可以是成千上万个氨基酸残基连接而成。 多肽与蛋白质有时混用，但一般将分子量在10000以下的称为多肽。 肽或蛋白质的水解是耗能的，由于高的活化能，水解很慢，蛋白质的肽键非常稳定，多数胞内条件下的半衰期为7年。 肽键就是一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基脱水缩合形成的键 肽链上的解离特性 氨基酸形成肽链后，整个肽链上只留下N端可解离的氨基、羧基端可解离的羧基、侧链上能够解离的R基团，原先氨基酸的?-氨基和?-羧基由于形成肽键而不再对整个肽链的解离有贡献。 肽也有特征滴定曲线及特征pI。 R基团的解离常数由于氨基酸的氨基和羧基被用于形成肽键称为残基，在一定程度上会发生改变，这种变化受到?-氨基及?-羧基失去电荷、与其他R基团的作用、其他能够影响解离常数的环境因子。 生物活性的肽和多肽的大小差异极大 不能对生物活性肽及蛋白质的分子量与功能之间作出相关性结论。自然存在的肽的大小从2个到数千个氨基酸残基，甚至最小的肽也能表现重要的生物学作用，如商业化合成的二肽L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯【人工甜味剂-阿斯巴甜(aspartame)或纽特健康糖（NutraSweet)，比蔗糖甜200倍】。 一些小肽在极低浓度下发挥作用 一些脊椎动物的激素是小肽，包括催产素（oxytocin）（9个氨基酸残基），由垂体后叶制造 ，能刺激子宫收缩；舒缓激肽（bradykinin）（9肽）能使呼吸道平滑肌收缩，抑制组织炎症；甲状腺激素释放因子（3肽），下丘脑分泌，能刺垂体前叶激促甲状腺素的释放，它们发挥作用的浓度极低。 与许多抗生素一样。一些极毒的毒蘑菇毒素，如鹅膏蕈碱（毒素）(双环的8 肽毒素） (amanitin)，对动物有致死作用，与真核生物RNA II聚合酶作用抑制转录。 蛋白质可以有不同的多肽亚基 一些蛋白质只含有一条简单的多肽链，而另一些蛋白质成为多亚基蛋白质，含有两条或更多条非共价结合的多肽链。多亚基蛋白质的独立的多肽链可以是同一多肽链，也可以是不同的多肽链。 有时，不同的亚基形成小的寡聚体(oligomeric) ，并以此进一步装配。这种小的寡聚体被称为原体(protomers)，原体再装配成更大的聚集体。如血红蛋白，四条非共价结合的多肽链，两条一致的?链和两条相同的?链，可以称为四条多肽亚基的四聚体或者??原体的二聚体；天冬氨酸氨甲酰磷酸转移酶由6个调节亚基（R）和6个催化亚基（C）组成，装配时先由1个C亚基和1个R亚基组成一个原体CR ，再由6个原体装配成一个有活性的酶。 一些蛋白质的两条或多条多肽链是共价连接的 胰岛素的两条多肽链通过二硫键共价连接，这种情况下，单条多肽链不是亚基，通常被简单地认为是肽链。 从蛋白质的大小估算氨基酸残基数 我们可以从一个不含有其他化学基团的蛋白质分子估算其中的氨基酸残基的大概数目，用蛋白质的分子量除以110，即为组成氨基酸的数目。 20种氨基酸的平均分子量为138，较小的氨基酸在多数蛋白质中的风度高，如果考虑不同氨基酸在蛋白质中出现的比例，平均分子量只有128，形成肽键时失去一分子水（18），因此，蛋白质分子中氨基酸残基的平均分子量为128-18=110。 有些蛋白质含有非氨基酸的化学基团 很多蛋白质，如核糖核苷酸酶、胰凝乳蛋白酶，仅含有氨基酸残基，没有其他化学基团-单纯蛋白质。但有些蛋白质，除氨基酸残基外，还含有永久连接的化学组成，被称为复合蛋白质，非氨基酸连接的化学基团被称为辅基(prosthetic group)。复合蛋白质的分类根据辅基的化学特性，如脂蛋白含有脂、糖蛋白含有糖、金属蛋白含有特异的金属。有些蛋白质甚至含有不止一种辅基，辅基通常对蛋白质的功能起重要作用。 肽的物理化学性质 肽末端α-羧基pKa值比游离AA中的大，而肽末端α-氨基pKa值比游离AA中的小，侧链R基的差别不大。 等电点（两性）。 酸碱性质取决于： α-羧基、α-氨基、侧链基团的解离 具有双缩脲(biuret)反应(H2N-CO-NH-CO-NH2) --Pr特有的反应（与硫酸铜-氢氧化钠溶液产生紫红色或蓝紫色颜色反应，可用于肽和蛋白质定量测定）。 蛋白质的结构层次 1952年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次: primary structure 一级结构： 氨基酸序列 secondary structure 二级结构：