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辅助孵出技术在ART的应用探讨 蔡令波 影响胚胎植入的三个主要因素： 1. 胚胎质量 2.子宫内膜质量 3. 影响孵出的一些因素，尤其是体外培养引起的透明带硬化. Cohen J, Hum Reprod，1992;7:685–691 Gott AL,Hum Reprod 1990;5:104–108 Edwards RG,J. In Vitro Fert Embryo Transf 1984;1:3–23 Yaron Y Fertil Steril 1994;62:225–232 De Felici M, Gamete Res1982;6:107–113 辅助孵化的的宗旨是促进发育中胚胎的孵化和植入能力。是通过对透明带的化学、激光或机械的削弱，使胚胎更易从透明带中孵出，从而达到提高种植率的作用。 透明带是由大量独特的糖蛋白构成，形成一个柔软的外层和一个较坚实的内层，透明带在人卵的厚度约为15μm。 透明带的厚度不仅可以影响精子穿透，也可影响植入率，由于卵母细胞的先天原因，或因为延长胚胎培养条件也可致使透明带过厚，致密或变硬，胚胎将不能孵化。 Cohen J Fertil Steril 1989:51:820-827 Gabrielsen A Hum Reprod. 2001:16:2166~2170 Letterie GS, Hum Reprod Rev 1997:8:116-125 透明带在卵子发生和早期胚胎发育中的作用 1. 透明带作为屏障保护卵子和早期胚胎着床前不受抗原的影响。 2. 透明带表面有精子结合的受体，在受精过程中非常重要。 3.透明带在精子与卵膜融合后改变结构，阻止多个精子穿透。 4. 透明带维持胚胎的三维结构和完整性。 要使植入顺利发生，透明带必须变薄且最终溶解。而正常体外受精胚胎仅有30％可发生正常孵化。研究认为，透明带过厚或透明带蛋白分解素的减少可能影响胚胎孵化。 Schiewe , Fertil Steril, 1995;63:288-294; Cohen J, J In vitro Fert Embryo Transfer 1991,8:179-190 Jacques Cohen在1992年首次提出在人类胚胎实施辅助孵化，即用人工方法在透明带上开孔，提高体外胚胎培养孵出率，得到较高的着床率和妊娠率。 Cohen J, Hum Reprod, 1992;7:685-691 辅助孵化可能通过以下机制改善胚胎植入率， 1.辅助孵化可从增厚和局部异常的透明带中挽救分裂的胚胎； 2.辅助孵化可促进发育中的胚胎更早地植入，增加了子宫内膜和胚胎发育的同步性； 3.辅助孵化减少了胚胎经历孵化所需的能力需求，对胚胎随后的生长发育有利。 Schoolcraft, Fertil Steril, 1994:62:551-554。 辅助孵出方法 机械切割 Tyrode酸性溶液 激光打孔 辅助孵化的时间：选择第三天可移植的胚胎，辅助孵化后胚胎继续培养1－2小时，或培养至第五天，进行胚胎移植。 辅助孵化透明带孔洞的大小 孔洞的大小十分关键。 开口过小可导致发育中的胚泡突出，从而造成卡陷、退化甚至死亡。还可增加单卵双胎的发生率。 开口过大，转移胚胎过程中容易造成将卵裂球挤出，并造成胚胎内在损伤。 辅助孵出临床适应征 辅助孵出指征 高龄、d3基础FSH升高， 透明带异常（过厚，颜色异常等） 前次IVF失败史