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研究苜蓿（紫花苜蓿）芽的乙酸乙酯萃取液抑制脂多糖在体内和体外诱导的炎症摘要本研究旨在探讨是否可以通过检查苜蓿芽乙酸乙酯提取物（ASEA）用于炎症性疾病发挥抗炎作用的主要成分。由此对患有急性炎症的BALB / c小鼠腹膜（IP）注射15毫克/公斤体重脂多糖（LPS）后的细胞因子的分布以及小鼠寿命进行了测定。结果表明注射毒素在9小时之后LPS诱导的炎症小鼠寿命呈负的TNF-α的血清水平，IL-6，和IL-1β。同时相关数据表明，在后期阶段抑制这些细胞因子炎症对小鼠的生存是有益的。体外实验则表明ASEA显著减少的IL-6和IL-1β的生产和有丝分裂原刺激的RAW264.7细胞的活性由NF-κB的反式激活。为了进一步验证ASEA在体内的抗炎作用，以25毫克ASEA / kg体重/天在50μl向日葵油管饲的BALB / c小鼠，对照以50微升葵花籽油/天PDTC（吡咯烷二硫代氨基甲酸，抗炎剂）组管饲的小鼠。管饲一周后，该PDTC组注射50毫克/公斤体重PDTC 1小时后，所有的小鼠注射15毫克/公斤体重的LPS。结果表明，ASEA和PDTC组在LPS攻击9小时后具有显著降低血清TNF-α，IL-6，和IL-1β水平的作用，与对照组相比具有显著的存活率。这项研究表明，ASEA具有抑制促炎性细胞因子的生产和缓解急性炎症的作用。背景越来越多的证据表明，全身性炎症是慢性疾病，如心血管疾病，癌症，和胰岛素抵抗的风险增加有关。该机理可能涉及巨噬细胞和T淋巴细胞活化，以及所释放的促炎细胞因子扩增炎症活性。炎症可以由促炎介体介导，包括肿瘤坏死因子（TNF）-α，白细胞介素（IL）-1，IL-6，干扰素（IFN）-γ，IL-12，IL-18，一氧化氮，和介导细胞粘附分子。这些介质帮助先天免疫反应，但它们的过量会导致急性期内毒素血症发生，最终引起组织损伤，器官衰竭，休克，甚至死亡在这些介质中，促炎细胞因子如TNF-α，IL-6和IL-1β，它们也可以激活NF-κB，同时通过NF-κB的激活，从而放大该细胞因子级联反应扩大炎症状态。因为它们在炎症过程中起驱动作用，能有效地调节其异常的生产从而能够有利于减少炎症性疾病的发生。因此，除了消炎药外膳食成分的应用近期已成为一个关注焦点。而最近已经提出的饮食策略，则包括抗炎饮食对于慢性疾病与炎症相关的预防。苜蓿（紫花苜蓿）芽是经常食用的蔬菜沙拉。它的叶子或种子可作为营养的补充制成散装药草，胶囊剂和粉状片剂在保健食品商店出售。苜蓿芽，叶，和根的提取物已被证明在研究降低动物和人类胆固醇水平方面有帮助。此外，苜蓿芽或叶片在传统的药用使用中还包括治疗关节炎，肾脏疾病，以及疖子。然而，这些治疗仍然需要科学检查。我们以前的研究表明，苜蓿芽的乙酸乙酯萃取物可通过弱化细胞因子和炎症反应，改善狼疮小鼠的自身免疫倾向疾病。因此，本研究的目的是通过体内LPS诱导的炎症小鼠和苜蓿芽的乙酸乙酯萃取物在体外细胞培养的实验来探讨其抗炎作用。材料和方法试剂和材料试剂脂多糖（LPS，大肠杆菌血清型O55：B5），吡咯烷二硫代氨基甲酸（PDTC）和刀豆球蛋白（续）A（Sigma化学公司;圣路易斯，MO，美国）均为分析纯，且溶于磷酸盐缓冲液盐水作为原液。新鲜的苜蓿（紫花苜蓿）芽（全球农庄有限公司;台北，台湾）冷冻干燥并且精细研磨成粉末。该粉末的近似组成为33.6％的碳水化合物，49.6％蛋白质，2.6％脂肪，10.5％的水，和3.7％的灰分。苜蓿芽的粉末经乙酸乙酯萃取（EA1:40，w / v的，微克/毫升），并在室温下搅拌2天。所采样的溶剂溶液被收集并通过滤纸过滤（Whatman公司2号；Whatman公司纸业有限公司，梅德斯通）。上述苜蓿芽乙酸乙酯萃取液（ASEA）通过旋转式蒸发器除去溶剂，得到43.1毫克/克的收率并储存在-20℃。细胞培养实验将RAW264.7细胞（生物资源收集和研究中心;台湾新竹）培养在37℃下并保持湿润的且含有5％二氧化碳，10％牛胎儿血清（FBS），2mM谷氨酰胺，1％非必需氨基酸和1mM丙酮酸钠的DMEM培养箱中。在这个实验中，RAW264.7细胞被接种在以2×106个细胞/毫升为NF-κB结合活性和mRNA的表达为细胞密度的6cm培养皿中，或以2×104个细胞/200μl/孔的细胞密度的96孔板中。在孵育前预先将细胞加入100纳克/ ml的LPS进行刺激，然后用各种浓度ASEA或PDTC（100μM）处理1小时。根据以前的一份报告显示，PDTC的浓度被证明可以抑制RAW264.7细胞因子的产生。而ASEA可溶解在无水乙醇中对细胞进行治疗（最终乙醇浓度≤在介质0.1％），对任一的RAW264.7细胞或原发性巨噬细胞都没有直接的毒性作用。对于NF-κB结合活性和细胞因子mRNA表达，分别经过24小时培养，将细胞裂解，以获得核提