组织培养技术(精选).docVIP

组织培养技术 组织培养的定义培养细胞的生长和增殖 细胞系的生长过程： 原代培养期：1-4周，与体内细胞相似，但分裂不旺盛，含细胞类型较多。 传代期：持续时间最长，细胞分裂增殖旺盛，保留原组织细胞的很多特征，一般传代30-50次后，细胞增殖逐渐缓慢。 衰退期：细胞增殖缓慢，并逐渐停止，细胞形态轮廓增强，最后衰退、死亡。 培养细胞的生长条件： 1、营养需要：碳水化合物、氨基酸、维生素、无机离子、促生长因子和激素 2、生存环境： 1）、温度：35℃-37℃ 耐低温不耐高温 2)、PH值：7.2-7.4 宁酸勿碱 3)、气相：O2、CO2（5% ）NaHCO3-CO2 4)、渗透压：260-320 mmol/L 3. 无污染及无毒： 防止污染 要注意防止微生物（细菌、病毒、真菌、支原体等）的污染、不同细胞类型的交叉污染。 出现以下情况时培养细胞可能有污染： 1) 培养液的酸碱度异常改变，如短期内颜色变黄 ； 2) 培养液出现混浊； 3) 光镜观察到大量颗粒或菌丝； 4) 细胞生长停止或出现死亡。 组织培养的常用设备 1. 仪器 包括各种无菌操作、消毒灭菌、细胞培养和保存的设备，如无菌室、超净工作台、CO2培养箱、高压蒸汽灭菌器、滤器、水纯化装置、倒置显微镜、离心机、液氮容器等 2.