亲和原理篇.pptVIP

Title or job number 亲和层析 内容 亲和层析是通过生物分子的生物相互作用进行生物分子分离的一项液相分离技术。 亲和层析 亲和层析的主要步骤 亲和层析特点 容易纯化一些别的方法不能分离的蛋白 比如：从变性的蛋白中分离天然蛋白及其不同功能的亚型 经常一步可用大于95 %的纯度 从大量杂质中分离高纯度的目标物质 可以特异性的去除杂质 非常快速 配基: 特异性的和目标物结合的基团 基架: 可以和配基耦合的内部填料 耦合: 配基和基架之间的共价结合 结合: 配基和目标产物之间的结合 亲和填料 金属螯合：可反复螯合不同金属，再用已结合依赖不同金属的蛋 白，一种介质可做多种纯化工作 活化偶联：最常用的是NHS activated 4 Fast Flow 和CNBr activated 4 FF 小配体亲和：纯化抗凝血酶III，凝血因子脂酶等 抗体亲和： 颜料亲和：纯化白蛋白，干扰素等 外源凝集素亲和：刀豆球蛋白A - 多糖，糖蛋白等 核酸亲和 金属螯合 可用反复螯合不同金属，再结合依赖不同金属的蛋白。 （His组氨酸、Cys半光氨酸、Try色氨酸） 填料类型： IMAC Sepharose：固定化金属离子亲和层析填料，基架已经活化好了，可用于直接耦合金属离子。 Ni Sepharose：已经耦合了Ni离子，可以直