第十五章 DNA的复制、修复和重组.pptVIP

Chapter 15 DNA的复制、修复和重组 中心法则 几个基本概念 §1 DNA的代谢 一、DNA代谢包括DNA复制、修复和重组 二、大肠杆菌遗传图 遗传图：通过遗传学方法测定的一物种各基因沿着染色体相对顺序和位置的排列图。 DNA聚合酶Ⅲ全酶的亚基组成 四、DNA复制许多酶和蛋白因子 DNA连接酶：连接DNA双链中的单链切口 真核细胞内有五种DNA聚合酶 细菌和真核生物复制体的组成 ?缺失、插入和移框突变； 5.....G C A G U A C A U G U C..3 丙 缬 组 缬 ...G A G U A C A U G U C.. 谷 酪 蛋 丝 G A C G U G C A G G C C U G A C C G U G C A G G C C U 核苷酸切除修复（2） 五、直接修复 （四）直接修复（1） 直接修复（2） 大肠杆菌DNA复制的终止 连环、解连环 四、真核生物DNA复制的特点 1. 真核生物染色体有多个复制起点，称自主复制序列(ARS) 或复制基因(replicator)；多复制眼，呈双向复制，多复制子。 2. 冈崎片段长约200 bp，相当于核小体长度。 3. 真核生物DNA复制速度比原核慢，速度为1000～3000 bp/ Min（仅为原核生物的1/20～1/50）。 4. 真核生物染色体在全部复制完之前起点不再重新开始复制；而在快速生长的原核生物染色体DNA复制中，起点可以连续发动复制。真核生物快速生长时，往往采用更多复制起点。 5. 真核生物有多种DNA聚合酶，DNA聚合酶Ⅲ（δ）是真正的复制酶，在增殖细胞核抗原（PCNA）存在下有持续合成能力。PCNA相当于大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ的β-夹子，RFC 蛋白相当于夹子装配器。 6. 真核生物线性染色体两端有端粒结构，它是由许多成串的短重复序列组成，端粒功能是稳定染色体末段结构，防止染色体间的末端连接，并可补偿滞后链5’-末段在消除RNA引物后造成的空缺，使染色体保持一定长度。端粒酶是含一段 RNA的逆转录酶。 7. RPA：真核生物的单链结合蛋白；RNaseH1和MF-1切除 RNA引物，DNA聚合酶ε填补缺口。 细胞核 ＞1 5’→3’ 外切酶 － 高 蚜肠霉素 修复 (POL Ⅰ) 细胞核 2 3’→5’ 外切酶 － 有PCNA时高 蚜肠霉素 核DNA合成 线粒体 2 3’→5’ 外切酶 － 高 双脱氧TTP 线粒体DNA合成 细胞核 1 － － 低 双脱氧TTP 修复 细胞核 4 － ＋ 中等 蚜肠霉素 引物合成 定位 亚基数目 外切酶活性 引物合成酶活性 持续合成能力 抑制剂 功能 DNA聚合酶ε DNA 聚合酶δ DNA 聚合酶γ DNA 聚合酶β DNA聚合酶α RP-A SSB 单链结合 TOPⅡ 旋转酶 消除螺旋张力 T抗原 Dna B（旋转酶） 解螺旋酶 POLε和DNA连接酶 POLⅠ和DNA连接酶 滞后链修复 RNase H和MF-1 RNase H和POLⅠ 除去引物 POLα Dna G 引物合成酶 RF-C(夹子装配器) γ复合物 定位因子 增殖细胞核抗原 Β夹子 进行性因子 POLα/POLδ POLⅢ全酶 复制酶 真 核 生 物 细 菌 组 成 真核细胞DNA复制示意图 五、复制起始的时序控制 六、逆转录（reverse transcription ） 定义: 以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA 的过程称为逆转录，由逆转录酶催化进行。 1970年Temin等和Baltimore分别从劳氏肉瘤病毒和小鼠白血病病毒等致病RNA病毒中分离出逆转录酶，迄今已知的致 癌RNA病毒都含有逆转录酶。 用DNA复制的特异抑制物（放线菌素D）能抑制致癌RNA病毒的复制，而对一般RNA病毒的复制无影响，可见致癌RNA病毒的复制过程必然涉及到DNA。所以Temin于1964年 提出前病毒的假说。 以前病毒形式整合到宿主细胞DNA中而使细胞恶性转化。单链病毒RNA RNA-DNA杂交分子 双链DNA（前病毒） 逆转录酶也和DNA聚合酶一样，沿5 ? 3’方向合成DNA，底物为四种dNTP,并要求短链RNA作引物。 + RNA+ DNA- RNA+ DNA- DNA+ 致癌RNA病毒