第细胞工程制药精读.ppt

四、影响细胞融合的因素 影响因素包括：促融剂、细胞本身性状、温度、pH、离子强度及离子种类。 1.亲本细胞表面覆盖绒毛较易融合，表面光滑规则难融合。 2.融合时要适量氧存在。 3.Ca2＋、Mg2＋ 、 Mn2＋ 等离子能促进融合 4.最佳温度为37℃，最佳离子浓度为0.1mol/L，最适pH为7.4－7.8. 五、细胞融合中的问题 1.提高杂种细胞形成率的措施 a控制适当的原生质体的形成率（85％) b.选择S期亲本细胞有利于形成异型双核体 c.减小营养缺陷型亲本细胞的生理效应对杂种细胞的影响 2.杂交瘤形成之后胞内染色体的稳定性。同一物种和亲缘关系较近的物种细胞间形成的杂种通常相当稳定。 异种间形成的杂种细胞会发生染色体丢失（如人鼠杂种细胞到100-150个细胞世代，人染色体只剩1-3条才会稳定） 措施:尽量多选择杂种细胞;稳定培养条件. 六、杂种细胞的筛选原理 并非所有的细胞都能融合。细胞融合本身又带有一定的随机性，除不同亲本细胞间的融合外，还伴有各亲本细胞的自身融合，需设法把含两亲本细胞染色体的杂种细胞分离或筛选出来。 最简便的办法无疑是应用选择培养基，使亲本细胞死亡，而仅让杂种细胞存活下来 已先后利用亲本细胞的药物抗体、营养缺陷型和温度敏感性等遗传标记，建立了许多选择系统，并成功地利用于杂种细胞的筛选。 主要有：药物抗性筛选、营养缺陷互补筛选