色谱-2012.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯 流动相： 干燥正庚烷 1份水饱和的正庚烷 2份干燥正庚烷 水饱和的正庚烷 改变流动相的 组成可改变分离 的选择性 * 4 应用 ?具有不同官能团的化合物 ?具有相同官能团，但数量不同的化合物 ?异构体 例：几种取代位置不同的硝基苯胺的分离。在硅胶吸附剂上的滞留顺序： 邻位间位对位 邻硝基苯胺 间硝基苯胺 对硝基苯胺 适合分离的物质 * 二 分配色谱法 1 分离原理 K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关 * 2. 固定相 A. 固定液涂渍在多孔载体表面 常用固定液 β,β’-氧二丙睛 聚乙二醇 三甲撑乙二醇 角鲨烷 固定液在使用中易流失 * B. 键合固定相 ODS(C18)键合相 硅胶 十八烷基氯硅烷 非极性 硅烷化反应 使用pH范围： 2-8 固定相非常稳定，在使用中不易流失。 * 键合固定相类型 疏水基团 烷烃（C8和C18）、苯基等 极性基团 丙氨基 氰乙基 醚和醇等 * 固定相极性流动相极性 正相分配色谱 组分极性越大，保留时间越长 反相分配色谱 固定相极性流动相极性 组分极性越小，保留时间越长 * 例：甲苯和苯酚的分离。流动相：甲醇-水 出峰顺序：苯酚，甲苯 出峰顺序：甲苯，苯酚 十八烷基键合相 二醇基键合相 * 高压泵 流动相溶剂 废液 色谱柱 进样口 检测器 三、高效液相色谱仪 * 一 高压输液系统 1 高压泵 要求 输出压力高 平稳、脉冲小 流量稳定可调 耐腐蚀 * 2 梯度洗脱装置 低压梯度 高压梯度 通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。 梯度洗脱 * 等度洗脱与梯度洗脱 * 梯度洗脱的特点 ?改善分离, 加快分析速度； ?改善峰形, 减少拖尾; ?可能引起基线漂移 分配比变化范围宽的 复杂样品应采取 梯度洗脱方式分离 * 3 贮液瓶及流动相 1) 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。 2) 适用于所选择的检测器。 3) 化学惰性好，以免破坏固定相。 4) 低粘度，增加样品的扩散系数，提高柱效。 5) 纯度高。溶剂不纯会增加检测器噪声，产生伪峰。 对流动相溶剂的一般要求 * 二 进样系统 准备状态 进样状态 ?六通阀进样 装置 ?自动进样器 * 三 色谱柱 内径：1～6 mm，柱长：5～30 cm； 柱填料粒径：5μm 分离柱 * 四 检测系统 1 紫外吸收检测器 氘灯 光栅 流通池 测量光电二极管 参比光电二极管 紫外检测器灵敏度高，精密度及线性范围较好 ，可用于梯度洗脱。 流动相选择有限制。仅适用于测定有紫外吸收的物质。 254nm * 2 荧光检测器 ?灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系） * 4 示差折光检测器 ?利用组分与流动相的折射率之差进行检测。 ?通用性好，灵敏度较低，不适用于梯度洗脱。 * 几个问题 色谱分离的原理 色谱定性原理、方法 色谱定量原理、方法 为什么需用质谱等其他方法辅助定性 * §4 色谱技术的应用 气体、易挥发的物质 ，一般沸点在450℃以下，分子量小于450的有机物 气相色谱适用对象 高沸点、不能气化、热不稳定的物质。 液相色谱适用对象 * ?卫生环境监测：气、水 ?食品检验：啤酒，清酒，葡萄酒，酱油、酸奶等 ?生化检验：血清、尿等 ?医药品检验： 一、分析检验 ?农药分析： * 二、有机合成中的应用 ?原料的纯度检测 ?合成中间体的分析 ?合成产物的分析、分离 ?合成过程的监测 * 三、材料研究中的应用 ?高分子材料中残留单体含量测定 间甲酚或氯苯为内标物 有机溶剂抽提或萃取 * ?高分子材料中添加剂的测定 * 1：BHT 2：1076 3：1010 * * * * * * * 组分 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯 峰面积 120 75 140 105 fi 0.97 1.00 0.96 0.98 校正因子归一化定量结果 27.0 17.5 31.3 24.1 峰面积直接归一化定量结果 27.2 17.1 31.8 23.9 C8芳烃异构体归一化定量分析 * (2)外标法(校准曲线法) 或 ?不使用校正因子 ?需准确控制进样量、