蛋白质标准曲线制作.docVIP

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蛋白质标准曲线制作

在96孔板中制作蛋白质标准曲线:Bradford法 编号 0 1 2 3 4 5 6 7 BSA标准液10mg/ml 0 0.1 0.2 1 2 5 7.5 10 蛋白液体积(稀释后) 0 1μL 2μL 10μL 20μL 5μL 7.5μL 10μL 蛋白液稀释到0.1μg/μL 蛋白液稀释到1.0μg/μL 蒸馏水 20μL 19μL 18μL 10μL 0 15μL 12.5μL 10μL Bradford液 200μL 200μL 200μL 200μL 200μL 200μL 200μL 200μL 先将BSA标准液10mg/ml也就是10μg/μl稀释十倍到1μg/μl,然后再稀释到0.1μg/μl。根据所要做的组数和重复,确定需要稀释的体积。 如果每组做3个重复,那么则需要90.9μl的0.1μg/μL蛋白液;67.5μl的1μg/μl蛋白液。 10μL的BSA标准液10μg/μl+90μL的水 100μL的1μg/μl蛋白液; 10μL的1μg/μl蛋白液+90μL的水 100μL的0.1μg/μl蛋白液。 将各液体加入96孔板中,震荡摇匀之后,测其吸光度值。 体系的总体积为220μL,横坐标为蛋白的量,纵坐标是吸光度值。 待测蛋白液的体积是20μL,最后将浓度换算为mg/ml. 例:表中的吸光度值为每组三个平行实验的平均值 根据标准曲线和待测蛋白的吸光度值即可求出其浓度:

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