粗糙链孢霉的杂交实验—遗传学实验技术范本.pptVIP

实验八 粗糙链孢霉的杂交 一、实验目的 1、了解顺序四分体的遗传分析方法 2、掌握重组值的计算及着丝粒作图的方法 3、观察由于基因转换引起的异常分离现象 二、实验原理 粗糙链孢霉，又称红色面包霉，在分类学上属于真菌中的子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属。 利用粗糙链孢霉进行遗传学分析有如下优点： ① 个体小，生长快，容易培养； ② 有性繁殖可产生大量后代； ③ 无性世代是单倍体，基因型可直接反映在表型上； ④ 一次杂交可达到高等二倍体一次杂交和一次测交的目的 粗糙链孢霉的生活史 从交换型子囊数占总子囊数的百分比，可以计算出该基因与着丝点间的交换值： 三、实验材料、用具及药品  粗糙链孢霉：野生型（lys+）菌株，赖氨酸缺陷型（lys-）菌株。 用具：酒精灯、试管、培养皿、载玻片、镊子、接种针、解剖针、滤纸、显微镜等 。 药品： 75%酒精 1、菌种活化? 把野生型和缺陷型菌种分别斜面接种到试管培养基上，置于28℃恒温培养箱中培养5-7天，直至菌丝上部有分生孢子产生，长好的菌株在菌丝上部可见红粉状孢子。 四、实验步骤 2、杂交培养基的配制： 将浸软的玉米粒剪碎，每试管2-3粒，加入3毫升2%的琼脂，再放入经多次折叠的滤纸。加上棉塞，消毒即可。 3、接种杂交 在无菌条件下，用接种环分别挑取Lys+和Lys-菌株的菌丝或分生孢子，接种于杂交培养基上，然后放在25℃恒温培养箱中培养，约经14天左右，可看到棕黑色的成熟子囊，此时即可在显微镜下观察分析。 4、灭活与收集子囊果? 在长有棕黑色子囊果的试管中，加75%酒精，静置20分，摇动片刻，将子囊果冲洗下来，倒入平皿中。 5、压片与镜检 ? 取一载玻片，用解剖针将子囊果挑出放到载玻片上，加1-2滴水，再盖上另一载玻片，用力压片，使子囊充分压散而末破裂，最后在显微镜下观察、记录各种类型子囊的数目。 粗糙链雹霉lys+与lys-杂交子囊孢子的排列方式 图中（1）（2）为非交换型；（3）（5）（6）缺少（4）为交换型子囊 作业 观察一定数目的子囊果，记录每个完整子囊的类型，按不同的子囊类型计数填入表中，计算Lys基因与着丝粒间的距离。 子囊类型 孢子排列方式 观 察 数 合 计 非交换类型 （第一次分离裂） 1 ＋ ＋ ＋ ＋ ― ― ― ― 2 － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ 交换类型 （第二次分离裂） 3 ＋ ＋ ― ― ＋ ＋ ― ― 4 ― ― ＋ ＋ ― ― ＋ ＋ 5 ＋ ＋ ― ― ― ― ＋ ＋ 6 ― ― ＋ ＋ ＋ ＋ ― ―