ALT改动.docVIP

一、目的：规范丙氨酸转氨酶测定的操作程序，确保丙氨酸转氨酶测定的结果准确 二、适用范围：适用于血清标本的丙氨酸转氨酶测定 三、方法原理： ALT试剂用于以一种动力速率分析法测定分析物活性。在此反应中，丙氨酸转氨酶催化L-丙氨酸和α-酮戊二酸向丙酮酸和L-谷氨酸的可逆的转氨基反应。然后丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）的存在下被还原为乳酸，同时还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）被氧化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）。系统将按比例自动把适量体积的样品和试剂分配到一个反应杯中。所用的样品对试剂比例为1比11。系统将监测340纳米的光吸收变化。此光吸收变化与样品中的ALT活性成正比，系统依此计算并给出ALT活性。 L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 丙酮酸 + L-谷氨酸 丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ 四、分析参数： 反应类型 速率法1 计算因子：0 主波长 340nm R1：242ul R2： 8 ul R3 ： 0 ul S：23 ul 反应起始读数112sec 反应终止读数176sec 标本采集与处理： 1 受检者的准备：空腹，采集前静坐5min，如有输液，应在停止输液3min后在另一侧肢体静脉采集。 2 静脉采血：除非是卧床病人，一般取坐位从肘静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。 3 抗凝剂：本室采用带分离胶的真空采血管，其中包含促凝剂。 4 标本处理：血标本应改尽快送到实验室，室温下放置20min后即可离心，可直接用分离胶管上机，加塞可在-4℃条件下保存3天，长时间保存要求分离出血清置-20℃冻存。 标本拒收标准： 1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明 3）采血量不足2ml 试剂：本室采用BECKMAN COULTER公司的产品，为液体双试剂。将试剂盒中的小瓶（A）试剂全部到入大瓶中的A孔，轻摇混匀。未开瓶2-8℃可保存到有效期内，短期的温度变化不影响性能，开瓶后在仪器内可稳定30天，不可冻存。 校准品：无需校准。 质控血清：必须每天分析至少两个水平的质控物（如BECKMAN COULTER Synchron 三水平质控物）。此外，在每次进行新的校正时、每使用一个新的试剂筒时、以及按适用的系统手册中的规定进行特别保养或故障排除后，都要运行质控物。 仪器：BECKMAN CX4、BECKMAN CX5、BECKMAN CX7、BECKMAN CX9、 BECKMAN LX 20、BECKMAN DXC 600/800 操作性能 1．分析范围 SYNCHRON CX分析仪可以测得的ALT的范围如下： 表4.0分析范围样本类型 传统单位 标准国际单位 血浆或血清 5~400 IU/L 0.1 ~ 6.7 μkat/L ORDAC指超出检测和校正范围。样品超过检测范围应通过ORDAC分析，或用盐溶液稀释后再分析。 2．灵敏度：灵敏度指最小可测浓度，即与零浓度可区分开的最小值（可信度达95%）。ALT检测的灵敏度为5 IU/L 。 3.等效性 等效性是通过相对被接受的临床方法对患者样品进行戴明回归分析而确定的。 4. 精确度 精确类型 样品类型 1 标准差 转换值j。 % CV IU/L μkat/L IU/L μkat/L ?同一实验内 ?血清/血浆 ?3.0 ?0.05 ?85.7 ?1.43 ?3.5 ?血清/血浆（ORDAC） ?NAk ?NA ?NA ?NA ?10.0 ?总数 ?血清/血浆 ?4.5 ?0.08 ?85.7 ?1.43 ?5.3 ?血清/血浆（ORDAC） ?NA ?NA ?NA ?NA ?15.0 精确度估计法 不精确类型 样品类型 系统编号 数据点编号l。 检测平均值 IU/L EP5-T2计算得到的点估计 标准差 % CV ?同一实验内 ?血清 ?对照1 ?1 ?80 ?21.4 ?0.9 ?4.2 ?血清 ?对照2 ?1 ?80 ?175.4 ?1.2 ?0.7 ?血清 ?对照3 ?1 ?80 ?323.8 ?1.9 ?0.6 ?总数 ?血清 ?对照1 ?1 ?80 ?21.4 ?1.0 ?4.5 ?血清 ?对照2 ?1 ?80 ?175.4 ?1.4 ?0.8 ?血清 ?对照3 ?1 ?80 ?323.8 ?2.1 ?0.7 十二、室内质控规则及失控限： 每天至少要求做两个水平以上的质量控制血清，与标本同时测定； 重新定标、更换试剂、仪器保养后应重新做质控 十三、质控达不到要求： 对同一份质控血清进行重新测定； 同批号内更换质控血清进行重新测定； 更换不同批号的质控血清重新测定； 对失控项目进行校准和定标