实验九动物细胞的原代培养.pptVIP

实验九 动物细胞的原代培养 1. 实验目的 初步掌握细胞的原代培养技术。 了解原代培养的意义。 学习台盼兰染色检定细胞死活的方法。 2. 实验原理 原代培养的两种主要方法： 消化法：37度，0.125%胰蛋白酶或0.02%EDTA消化20~40分钟。 组织块培养法：将组织块培养于平皿中，待组织边缘开始有单层细胞伸展开来，即从组织培养转为细胞培养。 3. 实验材料、用品 实验材料：昆明小鼠 实验用品： ①仪器及用具 超净工作台；C02培养箱；普通显微镜；倒置显微镜；水浴箱；离心机；高压灭菌锅；电热干燥箱。 解剖剪、解剖镊、眼科剪、眼科镊、培养皿、培养瓶、离心管、微量加样器、吸管、移液管、血细胞计数板、橡皮吸头、胶塞、酒精灯、试管架、棉球、无菌服、口罩、帽子等。 ②试剂 75%乙醇、RPMI 1640培养液（含小牛血清和青、链霉素）、0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)溶液、Hanks液、7.4%NaHCO3溶液。 4. 实验步骤 小鼠肝细胞的原代培养消毒→拉颈或摘眼球放血法处死小鼠→再消毒→逐层消毒解剖→取肝→清洗→剪碎组织约1mm3→洗涤。 一次消化法：37度下，青霉素瓶中加0.125%胰酶消化30分钟，不时吹打振荡。用加5