阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白羧基端短肽C31与自噬的相关性研究.docVIP

阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白羧基端短肽C31与自噬的相关性研究 　　摘要：目的： 对阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白羧基端短肽C31含有的毒性作用及其与自噬之间的相关性进行研究分析，并且探讨自噬是否可以介导该种物质的清除。方法 ：首先构建C31质粒作为实验组，而且构建VECTOR质粒，将其作为对照组；其次，通过脂质体转染法将其转染到Appsw Hek293细胞系里；然后通过WESTERN BLOT的方法对其表达进行有效验证；再者，对两种质粒应用Mtt法来进行瞬时转染四十八小时后的细胞存活率的检测，各自给予不一样的自噬调节药物，从而对C31和自噬相关蛋白采用WESTERN BLOT方法进行检测；最后，分别采用免疫共沉淀法、免疫荧光检测法对C31和LC3进行检测，分别确定其是否结合、能否共位，从而对自噬是不是介导C31降解的重要途径而进一步验证。结果： 实验组（C31）转染组细胞活力与对照组相比，明显较低（P0.05）；实验组和对照组的自噬水平没有表现出显著的差异；在采取雷帕霉素与饥饿处理方式以促进自噬的前提下，与没有加药处理的小组相比，LC3-Ⅱ水平较高，只是尚未具有统计学意义；C31水平与空载水平差异相对来说，并未具有统计学意义；3-MA自噬抑制剂的应用使得LC3-Ⅱ水平有些许下降，C31水平得以一定的改变，两者都不具有统计学意义；增加自噬体与NH4Cl、CQ之后，细胞自噬水