高效液相色谱法及其应用技术总结.pptVIP

高效液相色谱法 及其应用 高效液相色谱法 基本概念 分离原理 系统结构 分析方法 实际应用 色谱法（Chromatography）希腊语chroma(色)和graphos(谱) 色谱分析法的定义 色谱分析法是一种物理化学分离方法,其分离原理是：溶于流动相(石油醚)中的样品(植物色素)各组分经过固定相 (CaCO3)时，其与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等相互作用，且其作用的大小、强弱不同，导致在固定相中滞留的时间也不同，从而先后从固定相中流出，实现了不同组分的分离。当分离后的组分由流动相携带进入检测器时，就得到了一个一个的色谱峰。 色谱分离理论 各组分的理化特性不同吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等相互作用的大小、强弱各不相同 气相色谱法 超临界流体色谱法 纸色谱法 薄层色谱法 液相色谱法特别适用于分离沸点高和热稳定性差的物质  高效液相色谱法 (HPLC) High Performance Liquid Chromatography High Perssure Liquid Chromatography High Speed Liquid Chromatography 特点：高 高压：一般可以达到150~300kg/cm2 高效：分离效能很高,操作简便易行。 高速：一般可达l—10mL／min，分析一个试 样中的几个组分一般只要几到几十分钟。 高灵敏度：紫外检测器的最小检测量可 达0.01ng 。高效液相色谱的高灵敏度还 表现在所需试样很少，微升数量级的样 品就足以进行全分析。 适用面广：有多种分离模式可供选择，可分 析80%有机化合物。 操作自动化 高效液相色谱仪 手动进样器-六通阀/定量环 色谱柱（固定相、填料） 高效液相色谱检测器 检测器(detector)的主要性能要求： 灵敏度（sensitivity）高（检测限低） 噪音（noise）低 线性范围（linear range）宽 重复性（repeatability）好 适用范围广（通用型、专属型） 建立高效液相色谱分析方法 ①根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法。 ②选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格（柱内径及柱长）和选用固定相（粒径及孔径）。 ③选择适当的或优化的分离操作条件，确定流动相的组成、流速及洗脱方式。 ④由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。 色谱图和色谱峰参数 色谱图相关术语 保留时间(retention time, tR)——从进样开始到检测器测到某组分信号最大值(即流动相中该组分的浓度最大值)时所需的时间。 死时间(dead time, t0) ——完全不溶解于固定相因而不被固定相所保留的组分从进样到该组分信号最大值出现时所需要的时间。 校正保留时间(adjusted retention time ，tR) ——组分的保留时间减去死时间。 色谱参数的用途： 根据保留值可进行 定性分析； 根据峰高或峰面积可进行 定量分析； 根据色谱峰的保留值和峰宽参数 可以评价色谱的分离效率。 高效液相色谱分析方法 定性分析方法 定量分析方法： 外标法、内标法 外标法---标准曲线法  具体作法： 用待测组分标准物制备一系列标准溶液，在选定的色谱条件下取一定体积的标