第七章原核基因表达的调控.doc-课次16.docVIP

课次：16 教学目的：使学生了解基因表达调控是生命必需、色氨酸操纵子调控机制，掌握基因表达调控的几个基本概念、乳糖操纵子的负性调控机理。 重点：顺式作用元件和反式作用因子，乳糖操纵子阻抑蛋白的负性调控 难点：乳糖操纵子阻抑蛋白的负性调控 复习旧课：提问1人，了解教学效果。 导入新课： 第七章 原核基因表达的调控 一、基因表达调控是生命的必需 基因表达(gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。 对过程的调节就称为基因表达调控(gene regulation或gene control)。基因表达调控主要表现在以下几个方面： ① 转录水平上的调控； ② 转录后水平上的调控： mRNA加工成熟水平上的调控 ； 翻译水平上的调控 。 第一节概述 乳糖操纵子(lac operon)的结构 发现：1940年Monod：细菌在含葡萄糖和乳糖的培养基上生长时，细菌优先使用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌才利用乳糖繁殖增长； 基本概念 1 结构基因和调控基因 结构基因（structural gene）：编码蛋白质或RNA的任何基因。 原核生物的结构基因一般成簇排列，真核生物独立存在。 调控基因（regulator gene）：参与其他基因表达调控的RNA或蛋白质的编码基因。 其编码产物与DNA上的特定位点结合调控基因表达。 2 操纵基因 操纵基因（operator gene）：调控蛋白特异性结合的一段DNA序列； 调控蛋白结合在操纵基因的序列上，会影响其下游基因转录的强弱： 负性调控：减弱或阻止其调控基因转录，相应的调控蛋白称为阻抑蛋白； 正性调控：增强或起动其调控基因转录，相应的调控蛋白称为激活蛋白。 3 启动子和终止子 启动子 (promoter, P) ：能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。 终止子(terminator, T) ：给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列。 4 顺式作用元件和反式作用因子 顺式作用元件(cis-acting element) ：对基因表达有调节活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同处在一个DNA分子上的基因；通常不编码蛋白质，多位于基因旁侧或内含子中，如启动子。 反式作用因子(trans-acting factor) ：通过扩散自身表达产物（酶、调节蛋白）控制其他基因的表达, 其编码基因与其识别或结合的靶序列不在同一个DNA分子上。如转录因子。 5 转录因子 转录因子：转录起始过程中，RNA聚合酶所需要的辅助因子。转录因子：参与正调控的反式作用因子。 基因表达的调控基本上是反式作用因子与顺式作用元件的相互识别、相互作用。 第二节 操纵子 一乳糖操纵子的调控机制 1 阻抑蛋白的负性调控 乳糖被β-半乳糖苷酶降解为葡萄糖和半乳糖； 葡萄糖作为细胞的能源和碳源，半乳糖可被另外的酶系统转变为葡萄糖。 可诱导的负性调控－乳糖操纵子调控方式； 诱导物（inducer）：作用于阻抑蛋白，引起诱导发生的小分子物质。 Lac操纵子的诱导物： 异构乳糖：由乳糖被β-半乳糖苷酶降解产生； 异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 预先存在透过酶和β-半乳糖苷酶。非诱导条件下Lac操纵子微量表达。 原因：阻抑蛋白对操纵基因的结合不是绝对紧密 IPTG，义务诱导物：既能诱导酶的产生而本身又不被分解的诱导物。 2 阻抑蛋白的作用机制 2.1 阻抑蛋白与特异DNA（操纵基因）的结合位点，操纵基因的对称序列 2.2 阻抑蛋白的结构和功能的关系 阻遏蛋白的结构： N端1～59aa－头部片段：为HTH，与操纵基因DNA的大沟结合； 核心区：有6个(折叠，诱导物就结合在两个核心区之间的裂缝中； C端为两组亮氨酸拉链，形成四聚体。 4个亚基的核心片段接触形成四聚体，诱导物的结合可导致阻遏蛋白的构象改变。 2.3 阻抑蛋白对DNA的特异结合作用： 非诱导条件下，阻抑蛋白都结合在DNA上，特异位点的亲和力高，非特异位点的亲和力低。 诱导物的加入改变了阻抑蛋白的分布。 2.4 阻抑蛋白对RNA聚合酶的影响 阻抑蛋白和RNA pol可同时与DNA结合； 阻抑蛋白存在增强了RNA pol的结合： RNA pol 与启动子结合的平衡常数 1.9X107；有阻抑蛋白时，2.5X109。 虽然阻抑蛋白存在使得RNA pol不能转录。但加入诱导物后，释放出阻抑蛋白，闭合复合体变成为开放复合体，立即起始转录。 归纳小结：布置作业： 问答题： 简述乳糖操纵子中阻抑蛋白的结构和功能。 什么是顺式作用元件和反式作用因子，分别包括哪些？ 教学后记： 3 分解代谢产物阻抑作用的正调控 当E.coli的培养基中同时存在葡萄糖和乳糖时，细菌优先葡萄糖而