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培養基CULTURE MEDIA 合成或已知成分培養基 Synthetic or Defined Media 所有組成分都是已知化合物 複合培養基Complex Media 培養基含有一些化學組成不清楚的成分 蛋白胴(peptone)是肉、酪蛋白、大豆粉、明膠、和其他蛋白質的部分水解產物，通常作為碳源和氮源 牛肉萃取物和酵母萃取物分別是瘦牛肉和啤酒酵母的水溶性萃取物 液體培養基中加入1.0～2.0% (通常為1.5%)的瓊脂agar，可製成固體培養基 瓊脂是主要由D-半乳糖、D-葡糖醛酸組成的聚物，紅藻萃取。 優良的固化劑，40～42°C時凝固，凝固的瓊脂在溫度80～90 °C時可保持固體狀態 大多數微生物不能降解瓊脂 培養基的類型Types of Media 選擇培養基(selective medium) 培養基中加入特定物質，用來培養特定的微生物 加入膽鹽、鹼性品紅、或結晶紫等染 料可以抑制G+細菌生長，但不影響G-細菌生長EMB agar 以纖維素當作唯一碳源，分離纖維素分解細菌 鑑別培養基(differential medium) 根據微生物各自特點設計的用於區分和鑑定不同微生物的培養基 血瓊脂blood agar，可用於區分溶血性和非溶血性細菌，麥氏培養基…… 純培養物的分離 ISOLATION OF PURE CLUTURES 平板塗佈法和平板劃線法 The Spread Plate and Streak Plate 當每個細胞生長於培養基，經繁殖形成單個菌落(colony) 菌落可能是源於一個細胞 菌落是一群細胞在培養基上的外觀 每個菌落代表一個『純培養物』 不同種類的細菌其菌落型態會不一樣 觀察菌落型態即可知樣品菌種有無其它雜菌污染 同一種細菌在不同的培養基上菌落型態可能不一樣 平板塗布法Spread Plate 稀釋程度以最終在每個平板上長出的菌落數約30～300為宜 將樣品加在平板中央，用無菌玻棒將樣品均勻塗在培養基表面 可用來對樣品中微生物數量進行計數 平板塗布技術(Spread-Plate Technique) 1. 將少量的菌液用微量吸管滴在平板中央 2. 將玻棒侵入酒精中 3.將沾附酒精的玻棒稍用火燒並放置使其『冷卻』 4.用玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上培養 平板劃線法Streak Plate 將沾有菌種的接種環在培養基表面劃線 在劃線過程中，細胞逐漸分散，培養後 可形成單個菌落 成功獲得純培養物需依賴樣品中混合在一起的細胞是否有效地分開 平板傾倒法The Pour Plate 應用於細菌和真菌的單菌落分離過程 先對樣品進行系列稀 釋，使樣品中微生物密度降低，有利於在平板上形成單一菌落 然後將少量系列稀釋樣品分別與冷卻至45℃的液態、瓊脂培養基混合均勻，立即倒入『無菌』平板培養血中 大多數細菌和真菌短暫處於45℃下不會被殺死 當瓊脂凝固後，每個細胞都被固定在培養基中一定位置 平板劃線技術(Streak-Plate Technique) 平板培養血 (Petri dish) 發明者Julius Richard Petri的名字命名的 Petri是柯赫實驗室的一名成員， 於1887年發明 菌落的形態和生長Colony Morphology and Growth 當多種微生物混雜在一起時，根據它們在平板上形成菌落的形態特徵，可初步將所需分 離的微生物與其他微生物區別 菌落周圍細胞生長最快，菌落中央的細胞生長慢，而且中央部位的老細胞會自我裂解 * I區 III區 II區 IV區 *