乳白蛋白-油酸复合物抗癌活性研究进展.docxVIP

Sci Sci-Tech Advance [矛斗才支 ] 乳白蛋白-油酸复合物抗癌活性研究进展 文/方冰 郭慧嫒 张昊 任发政 中国农业大学教育部功能乳品重点实验室 【摘要】乳白蛋白可以同油酸结合形成诱导肿瘤细胞凋亡的复合物，即乳白蛋白-油酸复合物（Human Alpha-Lacta丨bomin Made Lethal to Tumor Cells, HAMLET )。研究已证实，HAMLET可以特异性地诱 导肿瘸细胞凋亡，对肺、喉、肾、结肠、膀胱、前列腺、卵巢、皮肤、淋巴等组织器官的40余种肿瘤细 胞均有良好的杀伤性同时，在膀胱癌的肿瘤模型鼠及人恶性胶质瘤实验中证实，HAMLET能够在体内杀 死肿瘤细胞。临床上，其对膀觥癌及皮肤乳头状癌患者也有良好的治疗效果。因此，大力幵展HAMLET的 研究工作将为肿瘤治疗提供一条新途径。 关键词：乳白蛋白；HAMLET;凋亡；肿瘤治疗 1995年，Hakansson等人在研 究母乳抗菌活性时意外发现，母乳中 含有一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的 物质，并且其分子里同乳白蛋白很相近，但单纯的乳白蛋白并不能引起肿瘤细胞的凋亡，故称这种诱导细胞凋亡的物质为乳白蛋白聚合物。随后 的几年，Svensson及Svanborg等人 对这种聚合物的组成和结构进行了深入的研究，确定这种聚合物为乳白蛋白-油酸复合物（Human Alpha-Lacta丨bomin Made Lethal to Tumor Cells, HAMLET ),并于2000年成功地在体外合成了这种诱导肿瘤细胞凋亡的物质。近年来，针对HAMLET 的研究已成为食品、医学以及分子生物学领域中的一个热点。本文将从HAMLET的结构、活性、作用途径及 临床应用4个方面展开论述。 HAMLET的结构 A -乳白蛋白主要存在于哺乳动 物的乳汁中，由122或123个氨基酸组 成，包含2个结构域，即较大的a-折叠结构域和较小的β-折叠结构域。 这2个结构域由Ca2+和4条二硫键稳定连接。 乳白蛋白（Lactalbumin, LA)本 身并没有诱导肿瘤细胞凋亡的活性， 必须同油酸结合后才能具备凋亡活 性。通过核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance, NMR )、透射电镜及原 子力显微镜观察HAMLET结构时发现， 油酸不是单纯的与蛋白质的氨基酸渕链 结合，而是被蛋白质包裹而形成胶囊 状复合物|41。LA的折叠核心位点在包含 Ca2+结合位点的a -区域和β -区域的界面上。由此可推测，油酸的结合区 域很可能是在Ca2+结合区域。油酸的结 合使得LA的结构发生了改变并在一定 程度上稳定了 HAMLET的构象。圆二色谱测定LA及HAMLET的二级结构时也 发现，HAMLET中的a-螺旋结构要明 显多于LA中的氨基酸末端序列测定 及氢/氘离子交换NMR研究表明，油酸 是通过与脱去Ca2+后伸展开的β –折叠区域结合，进而转化为α-螺旋。 2003年，Svensson等人研究了 不同碳链长度、不同饱和度、不同双 键构型的16种脂肋酸同LA结合形成 HAMLET的能力。结果表明，LA只 能同油酸及其他十八碳饱和脂肪酸 (如硬脂酸）、不饱和脂肪酸（如亚油酸）形成具有凋亡活性的复合物， 其他较短碳链的饱和及不饱和脂肪酸、反式脂肪酸（包括十八碳）均不能同LA结合，表明脂肪酸同部分伸展的LA形成了特定的构型，从而使得这些复合物能够特异性杀死肿瘤细胞。 HAMLET的促肿瘤细胞凋亡活性 2.1体外活性 在Hakansson等人首次发现乳白蛋 白复合物能够促进肺癌细胞A549的凋 亡之后，人们又研究了 HAMLET对其他 细胞的凋亡活性。迄今为止，已測定了 来源于肺、喉、肾、结肠、膀肮、前列腺、卵巢、皮肤、淋巴等40余种肿瘤 细胞对HAMLET的敏感性。所有检 测结果皆表明，肿瘤细脃在HAMLET处 理后发生了凋亡，尤其是淋巴类肿瘤细 胞，对HAMLET的敏慼性要高于其他实体瘤细胞。 2.2休内活性 HAMLET在体外取得了良好的效果后，研究者开始关注HAMLET在体内的抗肿瘤活性。2004年，Fischer等人 将人多形性胶质母细胞瘤细胞悬液注射 到裸鼠大脑中，对造模成功的老鼠颅腔 灌注HAMLET,并以LA作为对照。实 验发现，注射LA的老鼠在8周后出现颅 腔压力升高等症状，而注射HAMLET的 老鼠却无相应症状。NMR扫描脑部组 织发现，对人神经胶质瘤模型鼠的脑腔 灌注HAMLET可以显著减小脑瘤体积， 并延长老鼠的生存时间，而LA却无此 作用。同时对肿瘤组织进行凋亡检测发 现，HAMLET可以诱导脑肿瘤细胞凋 亡，而对周围健康脑细胞则无影响|31。 2009年，Mossberg等人对小鼠膀胱注 射人膀胱癌细胞，造模成功后对膀胱组织灌注HAML