细胞工程17693.pptVIP

专题二 细胞工程 一、动物细胞培养 1.细胞培养的概念： 把机体的某一组织或器官取出，分散为单个细胞，使其在人工培养条件下继续生存、生长甚至增殖的过程。 2.原理： 3.动物细胞培养的条件： （1）无菌无毒环境： 培养液及用具灭菌处理；无菌操作； 培养液加抗生素；定期更换 （2）营养： （3）温度和pH: （4）气体环境： 4.动物细胞培养的过程： 注： （1）组织块多从胚胎或幼龄动物获取（分裂能力强） （2）贴壁生长 和接触抑制 （3）原代培养和传代培养 （4）细胞株和细胞系 5.细胞的保存——冷冻和复苏： 短期：一般低温 （动物细胞4℃，几十天至几个月） 冷冻 长期：-196 ℃液氮（细胞“休眠”） 复苏 6.细胞培养的应用 （1）蛋白质生物制品的生长（酶\生长因子\单抗\疫苗） （2）皮肤移植材料的培育 （3）有毒物质检测 （4）生理、病理、药理学研究 二、植物组织培养 1.定义 利用植物的离体器官、组织或细胞，无菌条件下在含有营养物质的培养基上，给予适宜的光照、温度等环境条件进行人工培养，使其增殖、生长、发育而形成完整的植株。 2.原理—— 植物细胞的全能性 （1）概念：植物体的每一个活细胞都有形成完整植物体 的遗传潜能。 （2）全能性的高低： 受精卵 生殖细胞 体细胞；植物细胞 动物细胞 ？植物体内，细胞为什么没有表现出全能性？ 基因在特定的时间和空间条件下选择性表达，即分化。 （3）全能性表达的条件： 5.小结： （1）外植体： 离体的植物器官、组织或细胞 （2）愈伤组织： 高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞 （3）脱分化要避光；再分化要有光照 （4）再分化的两种方式： 不定芽；胚状体（胡萝卜） （5）培养基特点：固体培养基（琼脂）； 植物激素（细胞分裂素和生长素） （6）植物激素的作用： 细胞分裂素/生长素的比例 6.植物组织培养的应用： （1）植物的快速繁殖（微型繁殖） （2）培育无病毒植株 选材：根尖茎尖（生长点细胞） （3）生产植物产品 ？是不是所有的植物组织培养都以培养植株为目的？ （4）制造人工种子（未过关、优缺点） 胚状体 人工种子 人造胚乳 人工种皮 （5）单倍体育种：花药离体培养 （6）转基因植物的培养：和基因工程结合 （7）突变体的利用 三、细胞融合技术 1.概念： 2.原理： 3.诱导融合的技术： 化学法：聚乙二醇（PEG） 物理法：电击、震荡、离心、激光等 生物法：灭活病毒 4.融合过程： 5.动植物融合的不同： 植物细胞融合有去壁和细胞壁再生的过程 ？如何去壁？ 四、单克隆抗体的制备1.传统抗体制备方法及缺点 流程图： 4.应用： （1）可用于作为诊断试剂：准确，高效，快速 “早早孕试纸” （2）可用于疾病治疗 （3）可用于运载药物 （作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹”。“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物） 5.小结：单克隆抗体的制备用到的技术： 动物细胞融合；动物细胞培养 五、植物体细胞杂交技术 1.过程： 注：去壁方法；促融方法； 融合完成标志（细胞壁再生） 2.优点：克服了远源杂交不亲和的障碍 3.小结：植物细胞融合+植物组织培养 六、干细胞工程 1.干细胞的含义： 未参与分化或未完全分化的具有自我更新和分化潜能的原 始细胞。 2.干细胞分类： 全能干细胞： 多能干细胞： 专能干细胞： 3.干细胞工程： （1）含义： 体外对干细胞进行操作（体外增殖、定向诱导、分化、基因修饰、 组织形成等），最终将干细胞培养成人们所需要的各种细胞、组 织甚至器官。 （2）实例： ①造血干细胞移植： 原理：两种分裂方式 不均等分裂（造血干+祖细胞） ：正常情况自我维持 均等分裂（造血干:1→2）：迅速自我更新 造血干细胞来源： 骨髓： 动员后的外周血：视频 脐带血： ？这三种获得造血干细胞的方式各有什么优缺点？ 意义： 临床治疗血液系统疾病、遗传性血液病、顽固性自身免疫 疾病、严重的免疫缺陷病、癌症化放疗后的免疫力低下 ②胚胎干细胞移植：阅读课本P37，了解过程 ①过程： 分离培养+遗传操作（如基因修饰）+诱导分化+移植输入 ②意义：细胞、组织、器官移植。 ③困难：P38相关链接 抑制分化、诱导分化、免疫排斥 七、动物体细胞克隆技术 七、动物体细胞克隆技术 1.过程： 2.原理： 3.小结：体细胞克隆过程中用到了哪些技术？ 动物细胞培养；体细胞核移植； 胚胎培养；胚胎移植 4.应用：P41 （1）优良家畜的克隆 （2）濒危动物保护 （3）转基因动物 5.克隆技术存在的问题：P42 （1）成功率低 （2）夭折率高：先天性疾病和生理缺陷； 早衰 练习： 校本作业：P41 1-8 * * 动物细胞培养 单克隆抗体 细胞融合 植物体细胞杂交 植物组织培养 另：干