组培室外植体消毒等基本操作技术.docVIP

组培室基本操作技术 器皿和器具的洗涤 1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精 2.常用清洗方法 洗涤剂清洗法 超声波清洗法 3.玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿的清洗 用过的培养器皿的清洗 已经污染的玻璃器皿的清洗 灭菌 器具的灭菌方法 干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法） 火焰灼烧灭菌法 培养基的灭菌方法 高温蒸汽灭菌法 过滤除菌法 高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项： ① 灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。 ② 在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。 ③ 注意日常维护和检查,及时发现问题,及时修理，保证使用安全可靠。 使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项： ① 消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。 ② 锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。 ③ 进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。 无菌操作室内的灭菌方法 熏蒸灭菌法 射线灭菌法 外植体的表面灭菌 化学消毒剂灭菌法 抗生素抑菌法 1.外植体灭菌的常用杀菌剂 良好的外植体灭菌效果的含义： 外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。 2.外植体表面灭菌 外植体表面灭菌操作前的准备工作： ① 无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。 ② 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。 3.影响外植体消毒效果的因素： ①消毒剂种类 ②消毒剂使用浓度 ③消毒处理时间 4.培养过程中污染原因及对策 污染的病原类型 污染发生原因 防污染对策 外植体的接种 1 定义 2 外植体接种操作前的准备工作 接种室的清洁和灭菌 超净工作台的清洁和灭菌准备 操作人员无菌操作前的准备 3 外植体接种的具体步骤 常用外植体的种类 茎尖 带节茎段 节间部茎段 叶片和叶柄 鳞片 外植体的培养条件 温度 光照 湿度 培养基的营养物质和pH变化 培养物的气体环境