索氏提取―固相萃取―高效液相色谱法检测烟熏肉制品中苯并（a）芘.docVIP

索氏提取―固相萃取―高效液相色谱法检测烟熏肉制品中苯并（a）芘 　　摘 要：采用索氏提取-固相萃取-高效液相色谱法检测清真牛肉香肠中的苯并（a）芘含量，结果表明，该方法操作简单，检测结果准确，可信度高，回收率可以达到91%以上，特别是对于油脂含量较高的食品具有良好的效果，可以推广到其他肉制品中苯并（a）芘的检测。 　　关键词：索氏提取；苯并（a）芘；高效液相色谱；固相萃取 　　中图分类号：TS251.1 文献标志码：A 文章编号：1001-8123（2013）11-0030-03 　　烟熏肉制品香肠色泽金黄、风味独特，具有浓郁的烟熏风味，同时具有良好的贮藏性和较长的货架期，但是在肉制品的烟熏过程中，由于烟熏木屑的不完全燃烧或蛋白质和脂肪高温热解会生成多环芳烃类物质，这些物质具有致癌性[1-2]。其中苯并（a）芘是具有代表性的物质，我国对肉制品中苯并（a）芘的限量标准是不超过5?g/kg[3]， 　　欧盟根据最新修订的标准则是根据苯并（a）芘、苯并（a）蒽、苯并（β）荧蒽、chrysene四种物质的总量不高于30.0μg/kg（自2012年9月日至2014年8月31日），不高于12.0μg/kg（自2014年9月1日起）[4]。 　　目前，我国肉制品中苯并（a）芘的检测方法主要有两种，第一是目前的现行国标GB/T5009.27―2003《食品中苯并（a）芘的测定》[5]，这种方法是试样经过皂化后用有机溶剂提取，在经过液液萃取和柱层析，最后通过荧光分光光度计或目测法进行检测，这是目前最通用的苯并（a）芘检测方法，但是该方法步骤繁琐，而且需要消耗大量的有机溶剂；通过荧光分光光度计或目测法进行检测，检测结果的准确性有待改进；是农业行标NY/T 1666―2008《肉制品中苯并（a）芘的测定：高效液相色谱法》[6]，这种方法通过多步骤的液液萃取和反萃取收集肉制品中的苯并（a）芘，最后通过高效液相色谱仪进行检测，该方法相对于GB/T 5009.27―2003《食品中苯并（a）芘的测定》步骤简单，而且采用高效液相色谱法进行检测，准确度较高，但是由于在液液萃取和反萃取中，会损失一定的液体，同时，如果脂肪含量较高，最终样品中苯并（a）芘的检测结果会有较大的影响。 　　本实验以烟熏清真牛肉香肠为对象，研究一种新型的肉制品中苯并（a）芘的检测方法，该方法采用索氏提取-固相萃取-高效液相色谱法进行前处理和检测，步骤简单，检测结果准确，为目前肉制品中苯并（a）芘的检测提供技术参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　牛肉 市售；大豆蛋白、复合磷酸盐、卡拉胶、食盐、蔗糖等辅料购于超市。 　　正己烷、无水乙醚 国药集团化学试剂北京有限公司；烟熏木屑 北京美添前景科技有限公司；苯并（a）芘标准品 美国Sigma公司。 　　1.2 仪器与设备 　　Welchom BaP苯并芘专用固相萃取小柱 （22g/60mL）、WelchomC18E固相萃取小柱（200mg/3mL） 上海月旭科技公司；型号高效液相色谱仪-荧光检测器 美国Waters公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 烟熏清真牛肉香肠加工 　　以牛肉为原料，将其用绞肉机绞碎，通过搅拌机使其与辅料混匀，使用胶原蛋白肠衣灌肠、打结，在烟熏炉中50℃干燥30min，然后烟熏40min，温度50℃。将烟熏后的香肠在90℃蒸煮20min，得到的产品冷却后真空包装，最后进行巴氏杀菌，产品置于冷库中备用。 　　1.3.2 苯并（a）芘标准曲线的绘制 　　采用外标法进行定量，配制以甲醇为溶剂质量浓度为150ng/mL的苯并（a）芘标准溶液，然后分别取0、2、4、6、8、10mL质量浓度为150ng/mL的苯并（a）芘标准溶液，定容至10mL，配制成质量浓度分别为0、5、10、15、20ng/mL的标准溶液，再按照上述的色谱条件测定峰面积，以6种标准品的质量浓度为横坐标（x，ng/mL），对应的峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线为y = 83748x+39046（R? = 0.999），说明苯并（a）芘在质量浓度0～25ng/mL的范围内具有良好的线性关系。 　　1.3.3 色谱条件[6] 　　色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5?m）；流动相：乙腈-水（体积比88：12）；流速1.2mL/min；荧光检测器：激发波长384nm，发射波长406nm；柱温30℃；进样量10?L。 　　1.3.4 固相萃取柱的选择 　　根据苯并（a）芘的极性特点，选用WelchromC18E与Welchrom BaP（氧化铝）2种不同固定相填料对苯并（a）芘进行富集处理，采用空白加标检测苯并（a）芘回收率的方法进行比较。空白中苯并（a）芘质量浓度分别为5ng/mL和2